[发明专利]一种干细胞的冷冻液及其冷冻方法

说明书

本发明公开了干细胞的冷冻液及其冷冻方法，包括培养液与冷冻液，其特征在于，培养液为DMEM/F12培养液，冷冻液包括二甲基亚砜、总黄酮、土豆粉提取物、人血清白蛋白、樱桃提取物、棕榈油提取物、小牛血清、海藻糖、链霉素和胰蛋白酶；本发明的冻存液结合传统冻存液配制方法，在原有的基础上进行了改进，降低了二甲基亚砜的用量，新添加了总黄酮，活化细胞的功能，具有抗氧化衰老的作用；本发明的所使用的冻存液与现有技术相比，提高了脂肪干细胞的复苏比例，以及脂肪干细胞的生长成本；在冻存液中加入甘油，甘油对细胞起到保湿，同时可提供细胞生存所需要的部分能量。

技术领域

本发明涉及干细胞技术领域，具体为一种干细胞的冷冻液及其冷冻方法。

背景技术

脂肪干细胞是一种能够高度自我分化成各种细胞并且大量存在于脂肪组织中的细胞群体。它能够在特定的条件下分化成骨细胞、脂肪细胞、心肌细胞等不同种类的细胞。由于脂肪干细胞分化条件和方向的不确定性，目前临床上采用颗粒脂肪移植；应用细胞进行研究的前提是低温保存，以备随时取用。目前提取脂肪干细胞的冻存过程的干细胞存活率不高，或者恢复成正常细胞所需要的时将较长；为此我们提供一种干细胞的冷冻液及其冷冻方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

发明内容

本发明的目的可以通过以下技术方案实现：一种干细胞的冷冻液及其冷冻方法，包括培养液与冷冻液，其特征在于，所述培养液为DMEM/F12培养液，所述冷冻液包括二甲基亚砜、总黄酮、土豆粉提取物、人血清白蛋白、樱桃提取物、棕榈油提取物、小牛血清、海藻糖、链霉素和胰蛋白酶；

所述DMEM/F12培养液的百分比组成为40-60％；所述各冷冻液的百分比组成为：二甲基亚砜30-50％，总黄酮10-20％，土豆粉提取物5-10％，人血清白蛋白4-9％，樱桃提取物12-18％，棕榈油提取物3-7％，小牛血清1-7％，海藻糖5-15％、链霉素2-4％和胰蛋白酶3-8％。

优选的，所述土豆粉提取物所需要的主要成分为葡萄糖。

优选的，所述樱桃提取物所需要的主要成分为铁离子。

优选的，所述棕榈油提取物所需要的主要成分为为甘油。

优选的，所述DMEM/F12培养液的百分比组成为40％；所述各冷冻液的百分比组成为：二甲基亚砜30％，总黄酮10％，土豆粉提取物5％，人血清白蛋白4％，樱桃提取物12-％，棕榈油提取物3％，小牛血清1％，海藻糖5％、链霉素2％和胰蛋白酶3％。

优选的，所述DMEM/F12培养液的百分比组成为45％；所述各冷冻液的百分比组成为：二甲基亚砜35％，总黄酮13％，土豆粉提取物7％，人血清白蛋白6％，樱桃提取物14％，棕榈油提取物4％，小牛血清2.5％，海藻糖7％、链霉素2.5％和胰蛋白酶4％。

优选的，所述DMEM/F12培养液的百分比组成为50％；所述各冷冻液的百分比组成为：二甲基亚砜40％，总黄酮14％，土豆粉提取物8％，人血清白蛋白7％，樱桃提取物15％，棕榈油提取物5％，小牛血清4％，海藻糖10％、链霉素3％和胰蛋白酶5％。

优选的，所述DMEM/F12培养液的百分比组成为55％；所述各冷冻液的百分比组成为：二甲基亚砜45％，总黄酮17％，土豆粉提取物8％，人血清白蛋白8％，樱桃提取物18％，棕榈油提取物6％，小牛血清5.5％，海藻糖12％，链霉素3.5％和胰蛋白酶7％。

优选的，所述DMEM/F12培养液的百分比组成为60％；所述各冷冻液的百分比组成为：二甲基亚砜50％，总黄酮20％，土豆粉提取物10％，人血清白蛋白9％，樱桃提取物18％，棕榈油提取物7％，小牛血清7％，海藻糖15％、链霉素4％和胰蛋白酶8％。

一种干细胞的冷冻方法,包括以下步骤：