[发明专利]一种分析有益菌菌种的方法及其应用在益生菌菌种的筛选

权利要求书

1.一种分析有益菌菌种的方法，其特征在于，其步骤包含

(1)抽取检体中所包含的细菌的全部基因；

(2)提供多个引子组和一个内部校正引子组；该多个引子组是分别用于鉴别该检体中单一种类有益菌的引子组；该内部校正引子组是用于侦测该检体中全部种类细菌基因的引子组，和该内部校正引子组的前置引子是SEQ ID NO1和反置引子是SEQ ID NO 2；或前置引子是SEQ ID NO 3和反置引子是SEQ ID NO 4；

(3)以内部校正引子组和上述的细菌全部基因进行即时侦测聚合酶连锁反应(qPCR)，借此得到检体中全部种类的细菌基因产物含量，以Ct数值表示且定义为I；

(4)以该多个引子组分别和上述的细菌的全部基因进行即时侦测聚合酶连锁反应，借此分别得到该单一种类有益菌的基因产物含量，以Ct数值表示且定义为S；和

(5)进行一运算步骤得到该单一种类有益菌菌种的含量R，其计算公式如下所述，其中DCt是S和I的差值，借此完成所述的有益菌菌种的分析。

DCt＝S-I

a＝-DCt

R＝(2^a)×10⁷。

2.根据权利要求1所述的分析有益菌菌种的方法，其特征在于：该检体包含粪便、取自口腔组织的样本、取自鼻腔组织的样本、取自皮肤组织的样本、食物或土壤等生物或物体的样本。

3.根据权利要求1所述的分析有益菌菌种的方法，其特征在于：该DCt值的范围是作为一有益菌菌种的含量指标，其中，当30＜DCt，或DCt值未检出，定义此有益菌菌种在该检体中评估为低含量；当20＜DCt≤30，定义此有益菌菌种在该检体中评估为中间含量；当DCt≤20，定义此有益菌菌种在该检体中评估为高含量。

4.根据权利要求1所述的分析有益菌菌种的方法，其特征在于：该单一种类有益菌是嗜酸乳酸杆菌，其所对应的引子组是选自以下群组之一：前置引子是SEQ ID NO 5和反置引子是SEQ ID NO 6；前置引子是SEQ ID NO7和反置引子是SEQ ID NO 8；和前置引子是SEQ IDNO 9和反置引子是SEQ ID NO 10。

5.根据权利要求1所述的分析有益菌菌种的方法，其特征在于：该单一种类有益菌是比菲德氏菌，其所对应的引子组是选自以下群组之一：前置引子是SEQ ID NO 11和反置引子是SEQ ID NO 12；前置引子是SEQ ID NO13和反置引子是SEQ ID NO 14；和前置引子是SEQTD NO 15和反置引子是SEQ ID NO 16。

6.根据权利要求1所述的分析有益菌菌种的方法，其特征在于：该单一种类有益菌是鼠李糖乳酸杆菌，其所对应的引子组是选自以下群组之一：前置引子是SEQ ID NO 17和反置引子是SEQ ID NO 18；前置引子是SEQ ID NO 19和反置引子是SEQ ID NO 20；和前置引子是SEQ ID NO 21和反置引子是SEQ ID NO 22。

7.根据权利要求1所述的分析有益菌菌种的方法，其特征在于：该单一种类有益菌是凯氏乳酸杆菌其所对应的引子组是选自以下群组之一：前置引子是SEQ ID NO 23和反置引子是SEQ ID NO 24；前置引子是SEQ ID NO25和反置引子是SEQ ID NO 26；和前置引子是SEQID NO 27和反置引子是SEQ ID NO 28。

8.根据权利要求1所述的分析有益菌菌种的方法，其特征在于：该单一种类有益菌是副酪蛋白乳酸杆菌，其所对应的引子组是选自以下群组之一：前置引子是SEQ ID NO 29和反置引子是SEQ ID NO 30；前置引子是SEQ ID NO 31和反置引子是SEQ ID NO 32；和前置引子是SEQ ID NO 33和反置引子是SEQ ID NO 34。