[发明专利]一种快速发现微生物发酵过程早期染菌的方法在审
申请号: | 201911227425.5 | 申请日: | 2019-12-04 |
公开(公告)号: | CN110923290A | 公开(公告)日: | 2020-03-27 |
发明(设计)人: | 刘文超;郭学平;栾贻宏;穆惠军;任福群;穆淑娥;王玉盈;张宁宁;杨健民;王岩 | 申请(专利权)人: | 华熙生物科技股份有限公司;山东华熙海御生物医药有限公司 |
主分类号: | C12Q1/06 | 分类号: | C12Q1/06;C12Q1/04 |
代理公司: | 北京唐颂永信知识产权代理有限公司 11755 | 代理人: | 刘伟 |
地址: | 250101 山东省济*** | 国省代码: | 山东;37 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 快速 发现 微生物 发酵 过程 早期 方法 | ||
本发明涉及一种用于发现发酵液早期染菌的方法,其包括以下步骤:准备培养基接入待进行发酵的菌种开始发酵;发酵进行一段时间当发酵液达到给定OD值之前,取出发酵液样品;用血球计数板计算取出的发酵液样品的菌浓度,根据所述发酵液样品的菌浓度来确定所述发酵液样品的待浓缩倍数,所述浓缩倍数为足以将所述取样的发酵液样品的菌浓度浓缩至适合在显微镜下观察的给定的镜检菌浓度;按照确定的浓缩倍数,将发酵液样品浓缩至所述给定的镜检菌浓度;在显微镜下观察浓缩后的、给定面积的样品,确定有无杂菌的存在以及杂菌的数量;基于浓缩后、给定面积的样品中包含的杂菌的有无和数量来判定发酵液是否存在染菌现象。
技术领域
本发明涉及微生物发酵过程检测领域,具体涉及一种快速发现微生物发酵过程早期染菌的方法。
背景技术
微生物存在于自然界中的体型细小、结构简单、肉眼看不见,必须借助于特殊仪器放大后才能观察到的微小生物。微生物生长曲线包括四个时期:迟缓期、对数期、稳定期、衰亡期。
迟缓期特点:生长速率常数为零、菌体粗大、RNA含量增加、代谢活力强、对不良环境的抵抗能力下降。
对数期特点:生长速率最快、代谢旺盛、酶系活跃、活细菌数和总细菌数大致接近、细胞的化学组成形态理化性质基本一致。
稳定期特点:活细菌数保持相对稳定、总细菌数达到最高水平、细胞代谢产物积累达到最高峰、是生产的收获期、芽孢杆菌开始形成芽孢。
衰亡期特点:细菌死亡速度大于新生成的速度、整个群体出现负增长、细胞开始畸形、细胞死亡出现自溶现象。
在发酵培养过程中,染菌前期(即杂菌还处于迟缓期,杂菌量小)很难通过直接镜检发现染菌,一般在对数期才能发现,这时杂菌增长速度最快,一般很难控制,对发酵生产影响很大,严重时需要倒罐,进而影响到发酵产率、提取率、得率、产品质量、三废处理等。
目前生产要做的是提高生产技术水平,强化过程管理,加强过程控制。即便如此,在现有的生产条件下要做到完全不染菌是不可能的。偶有染菌批次,如能尽早发现,及时采取措施,可将损失降到最低。
目前仍然存在检查杂菌操作繁琐、费时、昂贵的问题。
发明内容
本发明为解决上述技术问题,申请人提出的技术方案是将样品浓缩后,镜检浓缩的样品,这样解决了染菌前期因为杂菌量小发现不了的问题,对微生物发酵企业具有重要的意义。具体地,本发明采用如下技术方案:
1.一种用于发现种子液或发酵液早期染菌的方法,其包括以下步骤:
提供种子液或发酵液取样样品,其中,发酵液取样样品由以下获得:准备培养基接入待进行发酵的菌种开始发酵,发酵进行一段时间当发酵液达到给定OD值之前,取出发酵液取样样品;
用血球计数板计算依上述获得的取样样品的菌浓度,根据所述取样样品的菌浓度来确定所述取样样品的待浓缩倍数,所述浓缩倍数为足以将所述取样样品浓缩至适合在显微镜下观察的给定的镜检菌浓度;
按照确定的浓缩倍数,将所述取样样品浓缩至所述给定的镜检菌浓度;
在显微镜下在给定面积内观察浓缩后样品,确定有无杂菌的存在以及杂菌的数量;
基于浓缩后样品在给定面积内所包含的杂菌的有无和数量来判定种子液或发酵液是否存在染菌现象。
2.根据项1所述的方法,其特征在于,所述给定OD值为0.8~2,优选1.0~1.8,进一步优选1.2~1.5。
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