[发明专利]一种生物组织中脂质化合物的原位分析方法

说明书

本发明提供了一种生物组织中脂质化合物的原位分析方法，包括：将生物组织切片贴在透明基片上，在真空环境下干燥，然后对其进行扫描；提供质量浓度为0.5‑15mg/mL的黑磷烯溶液作为基质；将扫描后的生物组织切片置于基质喷涂仪中，将黑磷烯溶液喷涂在生物组织切片表面；将喷涂后的生物组织切片装载在靶架上，并进行原位的基质辅助激光解析电离质谱成像分析。该分析方法采用黑磷烯作为MALDI‑MSI的基质，其在小分子区域的干扰低，质谱成像的重现性好、信号强，能提高对生物组织中脂质化合物分析的准确度。

技术领域

本发明涉及生化分析技术领域，具体涉及一种生物组织中脂质化合物的原位分析方法。

背景技术

质谱成像技术(mass spectrometry imaging，MSI)是目前应用广泛的一种新型分子可视化技术，是将组织切片上化合物形成的离子或碎片离子，按质荷比的不同进行测定，再由成像软件将测得的质谱数据转化成相应像素点并重构出目标化合物在组织表面的空间分布图像。该技术被广泛地应用于生物分析的各个领域。其中，基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight，MALDI-TOF)等软电离技术的出现使得生物大分子可以被电离，进而使质谱在测定复杂的生物样品领域(特别是核酸、蛋白质等)得到了广泛的应用，并具有分析速度快、信噪比高、质量范围宽等优点。这些优势使得于基质辅助激光解析电离-质谱成像(MALDI-MSI)技术成为了生化领域不可或缺的分析手段。

脂质组学作为代谢组学的重要分支，其研究对象为生物体的所有脂质化合物，主要表征生物体受到扰动后脂质代谢的变化以及介导信号转导的变化。协调的脂质代谢是能量平衡、膜结构及其动态改变信号、转导、自噬等重要生命过程中不可或缺的环节，因此分析生物组织中多种脂质组分具有重要意义。

对于MALDI-MSI，最大的挑战来自于基质效应，即由于基质对样品的溶解而引起被测组分的移位现象，导致空间匹配错误等问题。一来，传统的MALDI基质(如常用的2,5-二羟基苯甲酸、芥子酸等有机基质)在低分子量范围内(m/z700Da)会产生大量的碎片离子，严重干扰小分子物质的测定。二来，由于样品与基质的共混结晶不均匀，会导致信号重现性差，难以用于准确的分析。

因此，有必要提供一种能准确、高效地分析组织样品中脂质化合物的方法。

发明内容

鉴于此，本发明提供了一种生物组织中脂质化合物的原位分析方法，其利用二维材料黑磷烯作为MALDI-MSI技术的基质来检测生物组织中脂质化合物及质谱成像分析，黑磷烯基质在小分子区域的干扰低，信噪比高、信号重现性好，大大提高脂质化合物的分析效率和准确度。

具体地，本发明提供了一种生物组织中脂质化合物的原位分析方法，包括以下步骤：

提供生物组织切片，将所述生物组织切片融裱在透明基片上，在真空环境下干燥，去除所述生物组织中的水分，并使其贴紧所述透明基片，然后对所述生物组织切片进行扫描，以定位待成像的生物组织切片；

提供质量浓度为0.5-15mg/mL的黑磷烯溶液作为基质；将扫描后的所述生物组织切片置于基质喷涂仪中，将所述黑磷烯溶液喷涂在所述生物组织切片表面；

将喷涂后的生物组织切片装载在靶架上，并进行原位的基质辅助激光解析电离质谱成像(MALDI-MSI)分析。

其中，所述生物组织切片的厚度为2-20μm。优选为5-20μm。进一步优选为5-10μm。所述生物组织切片为离体的组织切片。生物组织切片可以是脑组织切片、肺组织切片、心脏组织切片等。

其中，所述真空环境下干燥的温度为15-25℃，所述干燥的时间为0.5-3h。