[发明专利]朱槿木尔坦棉花曲叶病毒病防治方法

说明书

本发明涉及朱槿木尔坦棉花曲叶病毒病防治方法；该方法步骤为，1)划分朱槿病毒病病情分级标准；2)进行木尔坦棉花曲叶病毒PCR检测，判断是否已感染木尔坦棉花曲叶病毒；3)根据步骤1的分级标准和步骤2的染毒确认在来年对朱槿进行综合防治。本发明的有益效果为，本发明所述的综合防治涉及朱槿植物的生长发育阶段，尤其是在生根阶段、移栽阶段的农业防治措施；进行四种毒力测试试验，周密的试验发现高效氯氟氰菊脂和阿维菌素在对致病朱槿植物的靶标生物‑‑‑烟粉虱防治上具有非常突出的效果。本发明的手段和方法可以在业界进行广泛推广，亦可为其他植物及其病毒的防治方法提供理论依据。

技术领域

本发明属于朱槿木尔坦棉花曲叶病毒病防治方法技术领域；尤其涉及木尔坦棉花曲叶病毒的特异性检测引物和β卫星分子引物；还包括朱槿的病毒的综合防治方法。

背景技术

朱槿Hibiscus rosa-sinense，又称扶桑、大红花等，属锦葵科木槿属。朱槿主要分布于华南、西南及华东的部分地区，是华南地区一种重要的园林观赏植物。木尔坦棉花曲叶病毒(Cotton leaf curl Multan virus，CLCuMuV)是一种引起朱槿曲叶病的重要病毒，当植株感病后，其症状表现为全株叶脉明显肿大(图1A)、叶片向上卷曲(图1B)，严重时叶脉肿大形成叶耳，最终植株长势衰弱，开花少或不开花，叶片黄化，最终枯死(图1C)。自然条件下，朱槿曲叶病主要由烟粉虱以持久方式带毒传播，另外扦插繁殖及带毒种苗也远距离人为传播，但不能通过机械摩擦和种子带毒传播。在国内除发现木尔坦棉花曲叶病毒侵染朱槿以外，还可侵染棉花、黄秋葵、垂花悬铃花和蔟生黄麻等寄主植物并引起曲叶病症状。2006年在我国广东省首次发现CLCuMuV侵染引起的朱槿曲叶病，此后陆续在广西、海南、福建、云南、江苏及新疆等地发现近年来，朱槿作为重要的园林绿化植物及家庭盆栽花，在全国各地大范围调运，广东广西及福建地区有大量生产朱槿苗木的园林苗圃和基地，而携毒朱槿苗木运输和传毒介体烟粉虱扩散极大增加了CLCuMuV向我国棉区扩散及暴发的潜在风险。在准确鉴定其病原种类及其分类地位的前提下，针对致病病毒及传毒介体[烟粉虱(图1D)]开展了田间发生动态的追踪监测，明确了朱槿曲叶病毒长距离播散主要是由于感病寄主跨区调运，短距离自然播散主要是由于带毒介体及带毒宿主传播，针对该病毒或随带毒寄主植物、或借助带毒媒介昆虫被动携带传播的问题探索出了病害防控的关键点。

发明内容

本发明正是为了解决上述问题缺陷，提供一种朱槿木尔坦棉花曲叶病毒病防治方法。

本发明采用如下技术方案实现。

一种木尔坦棉花曲叶病毒的特异引物，本发明所述的特异引物为CL-F：CAGGAAGCAGGAAAATACGAGA；CL-R：TGGCAGTCCAACACAAAATACG。

一种木尔坦棉花曲叶病毒的β卫星分子特异引物，本发明所述的β卫星分子特异引物beta-F：AAGTCGAATGGAACGTGAATGT；beta-R：GGAGACCAAAAGAGGAGAGAGA。

使用上述引物检测木尔坦棉花曲叶病毒的方法，本发明该方法为PCR检测，所述的PCR条件为：25μLPCR反应体系：DNA模板2μL(10ng～20ng)、PCR Mixer 12.5μL、10μmol/L上下游引物各1μL、灭菌水8.5μL；PCR反应条件：94℃预变性4min；94℃变性45s，52℃退火45s，52℃延伸1min，35个循环，72℃延伸10min。

使用上述检测方法进行朱槿综合防治的方法，本发明该方法步骤为，1)划分朱槿病毒病病情分级标准；2)进行木尔坦棉花曲叶病毒PCR检测，判断是否已感染木尔坦棉花曲叶病毒和感染轻重；3)根据步骤1的分级标准和步骤2的感染确认在来年对朱槿进行综合防治。

本发明所述的朱槿病毒病病情分级标准为，