[发明专利]一种微球试剂的制备方法

说明书

本发明提供一种微球试剂的制备方法，所述方法包括如下步骤：1)将微球溶液、血清淀粉样蛋白A抗体溶液和偶联剂溶液混合、超声分散；2)向步骤1)分散后的溶液加入第三助剂，混合、超声分散；3)向步骤2)分散后的溶液加入第四助剂，混合，得到所述微球试剂。本发明采用一步法制备所述微球试剂，只需将微球溶液、血清淀粉样蛋白A抗体溶液和偶联剂溶液按照特定比例混合，再利用超声分散，同时再配合各步骤条件，各个因素协同增效，得到了分散均匀稳定的微球试剂体系。该方法操作简单，受设备的限制小，单次生产量大，有效提高了生产效率，降低了生产成本。

技术领域

本发明涉及医学检测领域，具体涉及一种微球试剂的制备方法。

背景技术

血清淀粉样蛋白A(Serum amyloid A protein,SAA)是一种由肝脏分泌的急性相蛋白，并能与血浆高密度脂蛋白(HDL)结合。现在，临床研究把目光集中在炎性疾病急性反应期间的SAA类型。

SAA是个灵敏的参数，它在炎性反应大约8h后开始升高，且超过参考范围上限时间早于c反应蛋白(CRP)，然而CRP在正常人中的中位数值与参考范围上限的差距，大约有10倍，而在SAA中仅有5倍。这样在一些轻微感染，例如，许多病毒感染中SAA升高要比CRP更为常见。在感染性疾病中，SAA的绝对上升要高于CRP，因此SAA测定，尤其对“正常”与微小急性相反应可提供更好的鉴别。通常约2/3感冒患者SAA升高，但少于1/2的患者相同表现CRP升高。在病毒感染病例中，SAA和CRP浓度升高见于腺病毒感染者。SAA和CRP的反应形式在急性感染的恢复阶段是平行的，这同时适用于细菌和病毒感染。

随着SAA在临床中的应用范围越来越广泛，用于临床上检测SAA的方法主要有胶乳增强免疫比浊法、放射性免疫测定法、免疫速率散射比浊法、酶联免疫吸附试验等。

其中，目前市场上免疫比浊法制备的SAA的检测试剂盒大多采用两步法，第一步偶联剂将微球表面的官能团活化，第二步活化后的微球与抗体结合产生共价键。这种方法为了把未结合的抗体和偶联剂除去，需要进行多次的过滤和清洗，在过滤和清洗过程中，一般使用离心和超滤的方法。这些过滤和清洗过程耗时长、工艺繁锁，且受设备、人员、场地等多种因素限制，单批次制备量少、损耗大、生产成本高。

CN108828225A公开了一种血清淀粉样蛋白A含量测定的试剂盒、制备方法及检测方法。该试剂盒包括彼此独立的溶血剂R1和胶乳试剂R2，所述的胶乳试剂R2中包括包被血清淀粉样蛋白A抗体的胶乳；所述的包被血清淀粉样蛋白A抗体的胶乳为粒径60nm～130nm和190nm～220nm的胶乳分别包被抗血清淀粉样蛋白A1抗体和抗血清淀粉样蛋白A2抗体，然后再混合得到的。该发明中还提供一种血清淀粉样蛋白A含量测定的试剂盒的制备方法。但该制备方法必须经过重复多次的离心操作，不仅操作繁琐，而且极大地浪费了人力物力，生产成本高。

因此，针对上述现象，开发一种制备方法简单的SAA蛋白的检测试剂盒，有效提高生产效率，降低生产成本是本领域技术人员亟待解决的问题。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种微球试剂的制备方法。本发明采用一步法制备得到了所述微球试剂，该方法操作简单，受设备的限制小，单次生产量大，有效提高了生产效率，降低了生产成本。

为达此目的，本发明采用以下技术方案：

第一方面，本发明提供了一种微球试剂的制备方法，所述方法包括如下步骤：

1)将微球溶液、血清淀粉样蛋白A抗体溶液和偶联剂溶液混合，超声分散；

2)向步骤1)分散后的溶液加入第三助剂，混合、超声分散；

3)向步骤2)分散后的溶液加入第四助剂，混合，得到所述微球试剂。