[发明专利]一种抗菌核病基因GmGST1、转GmGST1基因植株的构建与应用

说明书

一种抗菌核病基因GmGST1、转GmGST1基因植株的构建与应用，属于植物基因工程技术领域。为了解决目前在抗大豆菌核病方面可利用的基因资源稀少的问题，本发明提供了一种抗菌核病基因GmGST1，序列如SEQ ID No.1所示，本发明在过量表达抗病基因GmGST1得到转基因大豆植株基础上，通过后代表型鉴定，确定了GmGST1能够参与到抗大豆菌核病反应中，可显著提高受体大豆种质中茎中可溶性色素水平和其对核盘菌的抗性，为大豆抗菌核病分子设计育种提供有效的分子标记和基因资源。

技术领域

本发明属于植物基因工程技术领域，具体涉及一种抗菌核病基因GmGST1、转GmGST1基因植株的构建与应用。

背景技术

大豆菌核病是由核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum(Lib.)de Bary)引起的真菌性病害，是一种危害严重的世界性病害，直接影响大豆的品质及产量，病情严重时发病率高达50％～90％，甚至绝产。由于传统育种方法的局限性，利用分子手段筛选及鉴定有效的抗病基因，对抗病品种的选育便显得尤为重要，然而目前抗病品种培育的基因资源稀少，制约了新品种选育的效率以及准确性。

在抗大豆菌核病基因研究方面，仅限于草酸氧化酶基因Germin、草酸脱羧酶及呼吸爆发氧化酶基因的应用，其他类型基因尚无相关报道，而大豆抗菌核病机制复杂，存在大量位点及关键基因有待挖掘与利用。

发明内容

为了解决目前在抗大豆菌核病方面可利用的基因资源稀少的问题，本发明提供了一种抗菌核病基因GmGST1，所述GmGST1的cDNA序列如SEQ ID No.1所示。

本发明还提供了扩增上述抗菌核病基因GmGST1的引物，引物序列如SEQ ID No.2和SEQ ID No.3所示。

本发明还提供了上述抗菌核病基因GmGST1的重组载体。

本发明还提供了上述抗菌核病基因GmGST1的重组菌。

本发明还提供了一种抗菌核病的转基因植株的构建方法，步骤如下：

(1)构建过表达上述的GmGST1基因的重组载体；

(2)将步骤(1)构建的重组载体转入农杆菌中，获得带有GmGST1基因的重组菌；

(3)将步骤(2)获得重组菌转入植物，获得抗大豆菌核病的转基因植株。

进一步地限定，步骤(1)所述的重组载体构建所用的中间载体为pCambia3301。

进一步地限定，步骤(2)所述的农杆菌为农杆菌EHA105。

进一步地限定，步骤(3)所述植物为大豆，优选为大豆合丰25或Maple Arrow。

本发明还提供了上述抗菌核病基因GmGST1在抗菌核病作物育种中的应用。

有益效果

本发明在过量表达抗病基因GmGST1得到转基因大豆植株基础上，通过后代表型鉴定，确定了GmGST1能够参与到抗大豆菌核病反应中。可显著提高受体大豆种质中茎中可溶性色素水平和其对核盘菌的抗性，为大豆抗菌核病分子设计育种提供有效的分子标记和基因资源。

附图说明

图1.大豆叶片总RNA的提取；

图2.GmGST1基因的克隆，其中M：DL2000，1：PCR产物；

图3.重组载体pCambia3301-GmGST1双酶切鉴定结果，其中M：DL2000，1：双酶切产物；

图4.转化农杆菌菌液PCR鉴定，其中M：DL2000，1，2：PCR产物；