[发明专利]一种血浆外泌体质谱峰及其运用

说明书

本发明涉及一种血浆外泌体质谱峰及其运用，所述的质谱峰如摘要附图所示，其可用于骨肉瘤肺转移检测以及骨肉瘤肺转移理论研究。本发明还涉及一种基于质谱技术检测外泌体特征谱早期诊断骨肉瘤肺转移的方法：利用外泌体在骨肉瘤肺转移和非肺转移患者中的差异不同及存在特征质谱峰，通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI‑TOFMS)技术检测患者血浆外泌体样本，从而早期诊断骨肉瘤肺转移。其中基质是由芥子酸和乙腈、三氟乙酸和去离子水组成的混合溶剂配制而成。本发明优点是：提供了判定骨肉瘤肺转移的标准外泌体质谱峰，其判定结果准确可靠、可信度高，具有很好的应用前景。

技术领域

本发明涉及骨肉瘤肺转移检测技术领域，具体地说，是一种血浆外泌体质谱峰及其运用。

背景技术

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术(Matrix-assisted laserdesorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)自1980年代发展起来，具有超高灵敏度和特异性，目前已广泛应用于临床实验室诊断。MALDI-TOF MS技术通过对生物分子的分子量进行准确测定，实现生物大分子的鉴定分析。通过分析不同细菌的指纹图谱，MALDI-TOFMS能实现临床微生物快速鉴定。此外，MALDI-TOF MS技术也广泛应用于蛋白质组学研究。

外泌体是胞外囊泡(ExtracellularVesicles，EV，胞外囊泡尺寸约30-1000nm)的一种，其直径约为30-150nm，外泌体囊壁由磷脂双分子层组成，囊壁富含膜蛋白。外泌体囊泡内含有蛋白质、核酸(miRNA、mRNA等)、膜蛋白或脂质等物质。大量文献和临床实践表明，外泌体可以作为各种具有外泌体分泌的临床疾病诊断或鉴别诊断广泛的运用。MALDI-TOFMS技术可以通过对外泌体样本的检测分析获得不同某一类疾病人体个体背景相同情况下，高灵敏度的发现疾病的变化，其中在肿瘤复发或转移进展中，患者自身的各种肿瘤相关的生物学信息可以通过外泌体数量、携带蛋白、核酸的不同被检测除差异。在不同肿瘤之中，该质谱特征谱峰会有所不同特征。

骨肉瘤是异质性非常强的恶性骨肿瘤，在传统各种肿瘤相关蛋白或标志物检测方面没有获得研究进展或临床上可以区分骨肉瘤肺转移的标志物或有效的高灵敏度的技术方法，在临床上一般通过CT影像学来发现骨肉瘤肺转移，存在早期骨肉瘤微小肺转移燥很难诊断和鉴别的临床困境。血液外泌体是最早就能反应骨肉瘤肺转移的生物学信息，利用骨肉瘤外泌体的质谱特征谱的差异，理论上可以在极早期诊断和鉴别诊断骨肉瘤肺转移。

关于本发明一种血浆外泌体质谱峰及其用途目前还未见报道。

发明内容

本发明的第一个目的是针对现有技术的不足，提供一种血浆外泌体质谱峰的用途。

本发明的第二个目的是针对现有技术的不足，提供一种检测血浆外泌体质谱峰的试剂的用途。

为实现上述第一个目的，本发明采取的技术方案是：

一种血浆外泌体质谱峰在骨肉瘤肺转移理论研究中的应用，所述的血浆外泌体质谱峰满足两个峰分别在3520-3530道尔顿和5130-5170道尔顿均存在时，检测结果为骨肉瘤肺转移阳性，否则为阴性。

为实现上述第二个目的，本发明采取的技术方案是：

检测血浆外泌体质谱峰的试剂在制备检测骨肉瘤肺转移试剂盒中的应用。

作为本发明的一个优选实施方案，所述的试剂是由芥子酸和乙腈、三氟乙酸和去离子水制成，其中，乙腈、三氟乙酸和去离子水的体积比为(45-55):(0.01-0.2):(44.9-54.9)；乙腈、三氟乙酸和去离子水制成混合溶剂，芥子酸和混合溶剂的质量体积比为(15-25)：(0.1-2)mg/ml。