[发明专利]一种液相色谱串联质谱检测血浆儿茶酚胺及其代谢物的方法

说明书

本发明属于临床生物样本检测技术领域，具体涉及血浆中儿茶酚胺及其代谢物检测技术，特别涉及高通量液相色谱串联质谱法检测儿茶酚胺及其代谢物(肾上腺素、去甲肾上腺素、多巴胺、甲氧基肾上腺素、甲氧基去甲肾上腺素、3‑甲氧基酪胺)的方法。所述方法包括：标准溶液配制、样本处理、样本检测以及计算公式。该方法可以同时检测儿茶酚胺及其代谢物共6种物质，具有高准确度、高灵敏度、高特异性以及所需样本体积少、样本前处理简单及耐受性好等优点。

技术领域

本发明涉及高通量液相色谱串联质谱的检测方法以及高通量液相色谱串联质谱法检测儿茶酚胺及其代谢物的方法。

背景技术

儿茶酚胺是一种含有儿茶酚和胺基的神经类物质，包括肾上腺素(epinephrine，E)、去甲肾上腺素(norepinephrine，NE)、多巴胺(dopamine，DA)，是由肾上腺髓质和一些交感神经元嗜铬细胞分泌的一类非常重要的神经递质，也是重要的激素物质。这三种儿茶酚胺都是由酪氨酸为前提转化得到的，在体内儿茶酚胺物质代谢后，被转变成相应的代谢产物如甲氧基肾上腺素(或变肾上腺素，Metanephrine，MN)、甲氧基去甲肾上腺素(或去甲变肾上腺素，Normetaneprine，NMN)、3-甲氧基酪胺(3-methoxytyramine)等。

儿茶酚胺及其代谢物在人体的心血管系统、神经系统、内分泌腺、肾脏、平滑肌等组织系统的生理活动中起着广泛的调节作用，同时还影响人体的代谢。甲氧肾上腺素及甲氧基去甲肾上腺素为肾上腺素及去甲肾上腺素的中间产物，特别地，被公认为是临床上诊断嗜铬细胞瘤的黄金标准，检测灵敏度和特异度均高于90％；神经母细胞瘤患者体内可同时分泌过量的肾上腺素、去甲肾上腺素以及多巴胺，因此同时检测儿茶酚胺代谢物，不仅可以间接反映体内儿茶酚胺的代谢情况，而且对嗜铬细胞瘤、神经母细胞瘤等中枢神经系统疾病的早期诊断及鉴别有重要意义。

目前杭州佰辰医学检验所有限公司于2016年申请了专利号：201610907368.5，发明名称“一种利用液相色谱串联质谱检测血浆中儿茶酚胺的方法”。该发明公开了一种利用液相色谱串联质谱检测血浆中儿茶酚胺的方法。本发明的方法用丹磺酰氯进行衍生化反应，提取后使用液相色谱串联三重四级杆质谱仪检测，同时定量血浆中包括多巴胺，肾上腺素，去甲肾上腺素的3种儿茶酚胺。但是仅能检测3种代谢产物，且样本处理步骤复杂，耗时长，不利于临床推广。广东中科康仪生物技术有限公司于2017年11月7日申请的中国专利“一种用液相色谱串联质谱技术检测儿茶酚胺及代谢产物的方法”，申请号CN201711081600.5，该发明公开一种用液相色谱串联质谱技术检测儿茶酚胺及代谢产物的方法，该方法可以高灵敏度地、特异性地一次性检测出儿茶酚胺及其代谢产物，包括MN和NMN、E和NE以及DA和3-MT，可以用于各种类型的PPGL进行诊断，但是有多个指标的最低定量限高于正常参考阈值，较多样本会出现检测不出的情况，并引起临床误判。

综上所述，现有技术中关于儿茶酚胺类物质检测的过程主要缺陷在于：一、儿茶酚胺类物质在血浆中含量低，对检测方法及仪器要求较高；二、儿茶酚胺类物质极性大，色谱柱保留困难，常用衍生化方法进行样本前处理，但其他操作复杂，不利于临床推广；三、一次检测6种儿茶酚胺类物质难度大，目前公开的多数方法只检测其中一部分物质。

发明内容

为了解决上述问题，本发明公开了一种灵敏度更高的液相色谱串联质谱仪检测儿茶酚胺及代谢物的方法。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的。

(一)标准溶液的配制。