[发明专利]蜡梅碱-2，3二酮及其制备方法和医药用途

说明书

本发明公开了从山蜡梅的干燥叶中分离得到的一种新的生物碱化合物蜡梅碱‑2，3二酮，具有如下结构：体外试验研究证明本发明所述化合物可抑制甲型流感病毒H1N1复制，具有良好的抗甲型流感病毒H1N1活性。可以进一步研究开发成抗流感病毒药物。

技术领域

本发明属于药物领域，具体涉及从山蜡梅的干燥叶中分离得到的一种新的三生物碱类化合物蜡梅碱-2，3二酮及其制备方法和医药用途。

背景技术

甲型流感病毒H1N1是人类最常感染的流感病毒之一，易变异、传染性强、传播快、发病率和死亡率高。从世纪以来已出现过数次全球性的大流行，由于我国人口基数大，密集程度大，流行性感冒在我国传播更加迅猛，给我国人民的健康带来巨大隐患。

目前，治疗甲型流感病毒的药物主要有两大类，分别是以离子通道蛋白为靶点的金刚烷胺和金刚乙胺以及以神经氨酸酶为靶点的扎那米韦和奥司他韦。由于流感病毒是分节段的病毒，容易发生变异并容易对现有药物产生耐药性，如欧洲已经出现了对金刚烷胺及奥司他韦产生耐药性的工毒株。此外，现有的抗流感病毒药物大多具有不同程度的毒副作用，尤其是离子通道阻断剂具有神经毒性等副作用。因此，研发低毒有效的抗甲型流感的药物十分迫切。

山蜡梅作为江西的道地药材，根据七七版《中国药典》记载山蜡梅叶具有解表祛风，清热解毒，其在预防感冒、流行性感冒等方面有较好疗效。在江西婺源地区，民间常自制山蜡梅茶(又称毛山茶)用于防治感冒，并具有较好疗效。随着现代科学技术发展，人民对蜡梅属植物进行现代植物学研究，发现蜡梅属植物中主要含有萜类、黄酮类、生物碱类、挥发油类、香豆素类等物质，这些化学物质的活性逐渐被发现，现在已广泛应用于各个领域。虽然蜡梅属植物中化学成分在各领域的作用都有报道，但其在抗流感病毒方面的却鲜有报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种从山蜡梅中分离出的具有抗甲型流感病毒H1N1作用的新的生物碱化合物蜡梅碱-2，3二酮。

具有下述结构式的化合物

本发明所述的化合物，可以与酸形成药学上可成的盐。可以为有机酸盐或无机酸盐，如盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐、乙酸盐，苯甲酸盐，马来酸盐，富马酸盐，苹果酸盐，柠檬酸盐，草酸盐，乳酸盐，琥珀酸盐，酒石酸盐，烷基磺酸盐、芳基磺酸盐，氨基酸盐(如半胱氨酸盐)等。

本发明的另一个目的在于提供上述化合物的制备方法，包括如下步骤：

(1)取山蜡梅叶，用水和/或醇提取，得提取物；

(2)将步骤(1)所得提取物进行酸提，过滤得酸水部分；

(3)将步骤(2)所得酸水部分用碱调节pH至7-12，使用三氯甲烷萃取，取三氯甲烷部位；

(4)将步骤(3)所得三氯甲烷部分加硅胶H拌样，装柱，进行硅胶柱色谱分离，依次采用体积比300:1、300:2、300:4、300:8、300:16、300:32、300:64、300:128、300:250、300:500、300:1000的二氯甲烷-乙醇溶液各洗脱1-3个柱体积(优选2个柱体积)，后再用甲醇洗脱1-5个柱体积(优选3个柱体积)，通过薄层硅胶色谱TCL检测、合并相同的馏分，依次得到7个馏分；

(5)取步骤(4)所得的第2馏分，通过凝胶柱色谱分离，优选葡聚糖凝胶色谱柱，更优选Sephadex LH-20，采用甲醇溶液洗脱1-5个柱体积(优选3个柱体积)，依次得到两个馏分，取第2馏分，经半制备高效液相色谱得到权利要求1所述化合物，C18反相色谱柱，流动相为体积比为40:60的甲醇-水溶液，检测波长230nm。

本发明一个具体的示例，采用半制备HPLC(waters-2489)，ODS柱(5μm，i.d.20mm×250mm，YMC Co.)进行色谱分离，流速为9mL/min。本发明所述化合物的保留时间为37min。