[发明专利]一种用于检测非洲猪瘟病毒核酸的反应体系、试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种用于检测非洲猪瘟病毒核酸的反应体系，其特征在于，所述反应体系为SHERLOCK反应体系，其包括用于扩增目的核酸片段的RPA引物对和/或crRNA；其中，所述引物对包括如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示序列的引物。

2.根据权利要求1所述的一种用于检测非洲猪瘟病毒核酸的反应体系，其特征在于，所述crRNA用于结合扩增后的所述目的核酸片段转录的ssRNA；其中，所述crRNA由crDNA合成，所述crDNA的序列如SEQ ID NO.3所示。

3.根据权利要求2所述的一种用于检测非洲猪瘟病毒核酸的反应体系，其特征在于，所述反应体系还包括Cas13a和荧光标记探针；所述Cas13a与已结合ssRNA的crRNA结合从而使其具有RNA酶活性，具有RNA酶活性的所述Cas13a切割荧光标记探针。

4.根据权利要求3所述的一种用于检测非洲猪瘟病毒核酸的反应体系，其特征在于，在所述反应体系中，所述引物对中的各引物的浓度均为200～800nM，所述crRNA的浓度为20～80nM，所述Cas13a的浓度为40～100nM，所述荧光标记探针的浓度为50～200nM。

5.根据权利要求3所述的一种用于检测非洲猪瘟病毒核酸的反应体系，其特征在于，所述反应体系还包括RPA反应液、T7转录酶、Mg²⁺、NTP；其中，所述RPA反应液包括重组酶、单链DNA结合蛋白和链置换聚合酶。

6.一种用于检测非洲猪瘟病毒核酸的试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1～5中任一项所述的用于检测非洲猪瘟病毒核酸的反应体系。

7.根据权利要求6所述的一种用于检测非洲猪瘟病毒核酸的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括核酸提取试剂和阴性对照。

8.一种引物对和/或crRNA、或如权利要求1～5中任一项所述的反应体系在制备用于检测非洲猪瘟病毒核酸的试剂中的应用，其特征在于，所述引物对包括序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的引物；所述crRNA由crDNA合成，所述crDNA的序列如SEQ ID NO.3所示。

9.一种非诊断目的的用于检测非洲猪瘟病毒核酸的方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤(1)使用核酸提取试剂提取待检样品中的核酸；

步骤(2)以步骤(1)提取的核酸为模板，采用如权利要求1～5中任一项所述的反应体系进行SHERLOCK反应；

步骤(3)在步骤(2)所述的SHERLOCK反应结束后，分析检测结果。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述SHERLOCK反应的反应条件为：反应时间为20～40min、反应温度为37～42℃。