[发明专利]一种鸭圆环病毒组织灭活疫苗及其卵黄抗体的制备方法

说明书

本发明涉及一种鸭圆环病毒组织灭活疫苗及其卵黄抗体的制备方法，所述疫苗的抗原液由质量比为1:3‑6的含鸭圆环病毒肝脏组织和无菌水的研磨液，经研磨、反复冻融、离心、过滤后制作而成，并在抗原液中添加5‑40mg/mL浓度的松花粉多糖作为免疫增强剂，与白油佐剂乳化而成；所述卵黄抗体是将该疫苗免疫蛋鸡,然后从高免鸡蛋蛋黄中提取纯化得到；所提供的鸭圆环病毒组织灭活疫苗制备工艺简单、成本低、作用效果好，剂型稳定，易储存，在养鸭业中的开发利用潜力巨大，具有广阔的应用前景。发明制备的卵黄抗体的安全性好,未出现由卵黄抗体引起的任何局部或全身不良反应，而且能够有效的预防和治疗鸭圆环病毒的感染,具有很好的商品化开发前景。

技术领域

本发明涉及家禽疫病免疫控制领域，具体涉及一种鸭圆环病毒组织灭活疫苗及其卵黄抗体的制备方法。

背景技术

鸭圆环病毒(duck circovirus，DuCV)是圆环病毒科圆环病毒属的新成员，无囊膜，单股环型DNA结构。该病毒于2003年由Hanemann在德国首次报道。在我国，姜世金等(2007)首次从2006年在福建省采集的鸭疫里默氏菌病鸭样品中检测到DuCV。刘少宁等(2008-2009)对来自山东、江苏、四川、福建和广东5个省份36个鸭群343份组织样品进行检测，发现DuCV检出率高达81.63％，鸭群阳性率达94.44％；其中山东18个肉鸭场阳性率为88.89％，12个种鸭场的阳性率为75％。这些数据说明鸭圆环病毒在中国主要养鸭省市鸭群中其感染相当普遍。从2016-2019年对全国各地发病鸭群的检测数据来看，DuCV的感染率仍然极高，并且多数与腺病毒、鸭细小病毒、坦布苏病毒、呼肠孤病毒、流感病毒和细菌等病原混感。对混感鸭群治疗发现，只要混感有DuCV的鸭群，都难以达到良好的治疗效果。DuCV感染过程缓慢，本身不造成明显的临床症状，因此非常容易被忽视，由于它主要侵害鸭的免疫系统，导致鸭抵抗力下降，因此极易造成其它病原的并发或继发感染，严重影响了治疗效果，造成了巨大的经济损失。由于目前DuCV在动物细胞和禽胚上难以增殖培养，因此目前尚无商品化疫苗。

卵黄抗体是指从免疫禽蛋中提取出的针对特定抗原的抗体,由于卵黄中仅有特异性的IgY类抗体,故称其为卵黄免疫球蛋白IgY。与血清抗体相比,卵黄抗体具有很多独特的优点：(1)来源广、产量高、成本低，只需连续免疫蛋鸡，从高免鸡蛋的卵黄中纯化即可得到；(2)卵黄抗体有良好的稳定性,耐热耐酸,且常温下保存时间长；(3)特异性强，针对不同抗原产生特异性抗体，治疗效果确切；(4)无过敏原，安全、高效、无残留、环保。由于受到鸭圆环病毒疫苗制作技术的限制，目前尚无商品化的疫苗上市，市场空缺巨大，用于预防和治疗早期感染的卵黄抗体更是未见报道。

发明内容

本发明的主要目的就在于克服上述现有技术的不足，提供一种鸭圆环病毒组织灭活疫苗及其卵黄抗体的制备方法，其中的鸭圆环病毒抗原是通过腹腔注射感染1日龄雏鸭，每隔7天静脉注射加强感染一次，每次接种同时注射250mg/kg的环磷酰胺诱导免疫抑制加强病毒复制，于25日龄采集感染鸭肝脏组织获得；疫苗所需抗原液由质量比为1:3-6的含鸭圆环病毒肝脏组织和无菌水的研磨液，经研磨、反复冻融、离心、过滤后制作而成，并添加5-40mg/mL浓度的松花粉多糖作为免疫增强剂，然后与常规白油佐剂乳化而成；所述卵黄抗体是将该疫苗免疫蛋鸡,然后从高免鸡蛋蛋黄中提取纯化得到，用于鸭圆环病毒的防治；所提供的鸭圆环病毒组织灭活疫苗制备工艺简单、成本低、作用效果好，剂型稳定，易储存，在养鸭业中的开发利用潜力巨大，具有广阔的应用前景。发明制备的卵黄抗体的安全性好,未出现由卵黄抗体引起的任何局部或全身不良反应，而且能够有效的预防和治疗鸭圆环病毒的感染,具有很好的商品化开发前景。

综合考虑鸭圆环病毒的感染特性和流行情况，我们认为这种病原的防控意义重大。本发明公开了该病原的产业化制备方法，将该病原联合制作成组织灭活疫苗，并添加免疫增强剂提高抗原的免疫原性，以达到预防该疾病的效果，从而为养鸭业的健康发展保驾护航。

本发明的具体发明构思如下：