[发明专利]可视化检测肿瘤外泌体的纳米杂化物探针的制备方法

说明书

本发明公开了可视化检测肿瘤外泌体的纳米杂化物探针的制备方法，基于铜离子配位黑磷量子点(Cu‑BPQDs)和有机荧光染料(Cy5)制备了新型双发射纳米杂化物载体探针，该探针可用于乳腺癌外泌体的可视化半定量检测。在探针的水分散液中加入含有外泌体的样品，引起探针表面DNA分子阀门开启，负载的电子受体分子释放，Cu‑BPQDs蓝色荧光从淬灭转为荧光恢复，此过程对Cy5红色荧光影响甚微。随着样品中外泌体浓度的增大，探针‑样品混合分散液的荧光颜色逐渐从红色转为蓝色，包括多种中间过渡色。建立样品中外泌体浓度与探针‑样品混合分散液的荧光颜色类型之间的关联，发展可视化检测肿瘤外泌体的新方法。

技术领域：

本发明属于多功能纳米杂化物和肿瘤外泌体检测探针的制备技术领域，具体涉及一种基于铜离子配位黑磷量子点和有机荧光染料的新型双发射纳米杂化物载体探针的制备方法，其制备的探针可用于乳腺癌外泌体的可视化半定量检测。

背景技术：

近年来的科学研究表明，肿瘤外泌体是一种新型的生物标志物，可广泛用于不同癌症的早期筛查和临床诊断。对肿瘤外泌体的有效检测，在一定程度上可避免癌症常规检测过程中存在的侵入式筛选，克服检测成本高、检测敏感度低等问题。外泌体是一种直径为50～100nm的细胞外囊泡，是经过內溶体途径从多囊体中释放出来的。由于外泌体从亲本细胞中携带了生物大分子，如 mRNA、DNA、跨膜和胞质蛋白等，外泌体可作为介导细胞间信息的信使，在疾病诊断，尤其是在癌症相关生理状态改变的检测方面发挥了重要作用。

现有的肿瘤外泌体检测技术主要包括纳米颗粒追踪分析、流式细胞术、表面等离子共振法、比色分析法、发光分析法、电化学分析法等。金芳芳等公开了一种流式细胞仪检测外泌体的方法(金芳芳；王延博；徐学博；陈张朋；薛姜飞.一种流式细胞仪检测外泌体的方法.国家发明专利.公开号CN110702589A)。何农跃等公开了一种基于分支滚环扩增的外泌体荧光(FL)检测传感器(何农跃；黄蓉蓉；李智洋.一种基于分支滚环扩增的外泌体FL检测传感器.国家发明专利.公开号CN110396536A)。Zhang等报导了Ti₃C₂ MXenes纳米片催化的电致化学发光生物传感器检测外泌体(Huixin Zhang,Zonghua Wang,Qiuxia Zhang,Feng Wang,Yang Liu.Ti₃C₂ MXenes nanosheets catalyzed highly efficientelectrogenerated chemiluminescence biosensor for the detection of exosomes.Biosensors andBioelectronics,2019,124–125,184–190)。Doldán等报导了基于表面标志物介导信号放大的电化学三明治免疫传感器用于检测外泌体(Ximena Doldán,Pablo Fagúndez,Alfonso Cayota,Justo Laíz,Juan Pablo Tosar, Electrochemical sandwichimmunosensor for determination of exosomes based on surface marker-mediatedsignal amplification,Analytical Chemistry,2016,88,10466 -10473)。

尽管有关外泌体检测的技术已有文献资料报导，但现有的外泌体检测技术仍然存在瓶颈，急需在纳米级肿瘤外泌体的选择性、灵敏性、可视化分析、定量检测等领域取得进展。基于此，本发明公开了一种基于铜离子配位黑磷量子点(Cu-BPQDs)和五甲川菁类FL染料Cy5的新型绿/红双发射FL纳米杂化物载体探针的制备方法，该纳米探针可用于乳腺癌外泌体的比率FL可视化半定量检测。截止目前，尚未检索到有关基于Cu-BPQDs/Cy5的纳米杂化物载体探针的制备，以及基于纳米杂化物载体探针可视化检测肿瘤外泌体的国内外文献和专利报道。

发明内容：

本发明的目的在于克服上述现有技术存在的不足，设计一种高选择性、高灵敏性、可视化分析和半定量检测乳腺癌外泌体的新方法。