[发明专利]一种非分泌型的人白细胞介素15及应用

说明书

一种非分泌型的人白细胞介素(IL‑15)。所述的非分泌型IL‑15由信号肽，成熟的IL‑15序列，柔性链接，以及内质网驻留信号依次串联组成。本发明的非分泌型IL‑15通过使用优化的信号肽和内质网驻留信号，能在细胞内高效表达并防止IL‑15分泌到细胞外部。T细胞或NK细胞在转染了本发明的非分泌型IL‑15后，能在没有外源IL‑2或IL‑15的条件下保持杀伤力并继续增殖。在T细胞或NK细胞里同时表达本发明的非分泌型IL‑15和CAR结构后，所得的细胞能在没有外源IL‑2或IL‑15的条件下特异性地杀伤癌细胞。

技术领域

本发明属于免疫治疗领域，尤其是对免疫细胞进行基因工程改造以加强对癌细胞的杀伤力。

背景技术

近年来随着免疫学研究的进一步深入，免疫疗法已成为续手术、化疗、放疗后另一种治疗癌症的重要手段。其中以嵌合抗原受体T细胞（CAR-T)为代表的细胞免疫疗法更是在治疗血液肿瘤方面取得极大的成功，但是在利用免疫细胞治疗更广泛存在的实体瘤方面，无论是新兴的CAR-T还是传统的肿瘤浸润淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocyte,TIL) ，都还没有突破性进展，迫切需要有新技术打破这僵局。

目前细胞免疫疗法都是先在体外激活扩增免疫细胞后再回输给患者，体外扩增免疫细胞时采用远远高于体内生理浓度的IL-2，这就导致回输的免疫细胞在体内正常IL-2环境下存在活性低，生存期短的问题(Dudley ME, Wunderlich J, et al. J Immunother.2001 Jul-Aug;24(4):363-73)，严重影响了细胞免疫疗法的疗效 (Robbins PF, DudleyME, et al. J Immunol. 2004 Dec 15; 173(12): 7125–7130)。

为克服上述的不利影响，当前在临床上的措施是在回输免疫细胞后连续几天静脉推注高剂量的IL-2以维持回输的免疫细胞的活性(Stevanović S. Helman SR, et al.Clin Cancer Res. 2019 Mar 1;25(5):1486-1493)，但这方法因为采用了高剂量的IL-2注射，副作用和风险都很大。

相比于IL-2,IL-15能更好地维持T和NK细胞的长期活性(Waldmann T, Nat RevImmunol. 2006 Aug;6(8):595-601)。已有报道采用分泌型IL-15(Zhang J, Sun R, etal. Haematologica. 2004 Mar;89(3):338-47)或膜结合型(membrane bound)的IL-15(Imamura M, Shook D, et al. Blood. 2014 Aug 14;124(7):1081-8)能维持NK细胞在低或无外源IL-2和IL-15情况下的增殖，并能增强NK细胞的杀伤力，但这类方法也有其缺陷，即分泌的或膜结合型的IL-15会激活其周围无关的非靶向免疫细胞，输入体内有可能引起严重副作用(Fehniger TA, Suzuki K, J Exp Med. 2001 Jan 15; 193(2): 219–232)。

发明内容

为提高体外扩增的免疫效应细胞在回输到体内后的活性，同时避免使用IL-2或IL-15激活非靶向细胞所带来的副作用，本发明公开了一种非分泌型的人白细胞介素15。所述的非分泌型的IL-15由优化的信号肽，成熟的人IL-15序列，柔性链接，以及内质网驻留信号依次串联组成，能在细胞内大量表达但不分泌到细胞外，有效地解决了上述问题。