[发明专利]一种CSF1-Albumin重组蛋白及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种CSF1‑Albumin重组蛋白及其制备方法和应用，本发明针对现有CSF1蛋白体内半衰期短的缺陷，将CFS1蛋白与Albumin蛋白进行融合设计，大大提高了CSF1蛋白在体内的稳定性，延长了CSF1蛋白的半衰期，并且避免了抗体依赖性增强现象；进一步的，本发明构建了上述CSF1‑Albumin重组蛋白的生产载体，并提供了一种高效的克隆筛选和转染细胞的方法；本发明还提供了上述CSF1‑Albumin重组蛋白在细胞中的高效表达和纯化的方法；优选的，本发明还提供了上述CSF1‑Albumin在促进组织修复方面的应用方法。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及人CSF1-Albumin重组蛋白，设计、制造CSF1-Albumin的方法以及CSF1-Albumin应用。

技术背景

CSF1(Colony stimulating factor 1)，集落刺激因子对于巨噬细胞的发育、分化与存活都起到非常重要的作用。而巨噬细胞对于器官、组织损伤之后的修复具有极其重要的作用。巨噬细胞具有清除受损处细胞残骸、抑制成纤维细胞的过度激活以及促进器官、组织干细胞的增殖等功能。因此，可用外源性重组CSF1提升巨噬细胞的数目，从而促进器官、组织的损伤修复。

CSF1作为一种细胞因子，在体内存在时间极短，而现有的外源性重组CSF1与其受体结合后，会发生内吞作用，从而降解CSF1。因此需要寻找新型的重组CSF1，增强CSF1在体内的半衰期。

发明内容

本发明旨在提供一种针对器官、组织损伤的新药物，并克服现有技术的不足，提供一种长效CSF1-Albumin重组蛋白的方法和应用。

为了达到上述目的，本发明提供的技术方案为：

一种CSF1-Albumin重组蛋白，其特征在于，所述重组蛋白同时包含CSF1蛋白和Albumin蛋白的活性结构。

进一步的，上述一种CSF1-Albumin重组蛋白，所述重组蛋白含有SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10中的的部分或者全部氨基酸序列。

进一步的，上述一种CSF1-Albumin重组蛋白，所述SEQ ID NO.10的N端连接于所述SEQ ID NO.9的C端。

进一步的，上述一种CSF1-Albumin重组蛋白，所述重组蛋白的氨基酸序列如SEQID NO.11所示。

进一步的，编码上述CSF1-Albumin重组蛋白的核苷酸序列。

进一步的，一种表达上述CSF1-Albumin重组蛋白的生产载体的构建方法，包括以下步骤：

(1)以CSF1的cDNA为模板，利用序列如SEQ ID NO.1所示的正向引物和序列如SEQID NO.2所示的反向引物进行PCR，扩增出序列如SEQ ID NO.3所示的基因片段CSF1；

(2)以Albumin的cDNA为模板，利用序列如SEQ ID NO.4所示的正向引物和序列如SEQ ID NO.5所示的反向引物进行PCR，扩增出序列如SEQ ID NO.6所示的基因片段Albumin；

(3)以上述步骤得到的基因片段CSF1与Albumin为模板，利用序列如SEQ ID NO.1所示的正向引物和序列如SEQ ID NO.5所示的反向引物进行Overlap PCR得到序列如SEQID NO.7所示的融合基因片段CSF1-Albumin；

(4)将融合基因片段CSF1-Albumin利用酶切克隆至克隆载体，得到CSF1-Albumin重组蛋白的生产载体。