[发明专利]一种新型冠状病毒IgG抗体的酶联免疫法检测试剂盒

权利要求书

1.一种新型冠状病毒IgG抗体的酶联免疫法检测试剂盒，其特征在于：包括抗FITC抗体酶标板、FITC标记新型冠状病毒抗原、辣根过氧化物酶标记鼠抗人IgG单克隆抗体；其中，FITC标记新型冠状病毒抗原中的新型冠状病毒抗原包括合成多肽SEQ ID NO：1、SEQ IDNO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4；且4种合成多肽的质量比为1:1:1:1。

2.根据权利要求1所述的新型冠状病毒IgG抗体的酶联免疫法检测试剂盒，其特征在于：所述FITC标记新型冠状病毒抗原的制备包括以下步骤，

1）将FITC与合成多肽按摩尔比1:（1-3）进行混合，避光37℃反应6-12h；

2）将上述步骤1）完成的标记液用0.01-0.05M PBS 于2-8℃透析24h，加入等体积甘油，-20℃保存。

3.根据权利要求1所述的新型冠状病毒IgG抗体的酶联免疫法检测试剂盒，其特征在于：还包括TMB显色剂A液和B液、以及终止液；所述终止液为浓硫酸、盐酸、氢氧化钠中的一种。

4.根据权利要求1所述的新型冠状病毒IgG抗体的酶联免疫法检测试剂盒，其特征在于：还包括稀释液，Tris 1-8g/L；MES 2-5g/L；NaCl 5-20g/L；丙三醇 20-50mL/L ；海藻糖5-20g/L；Tween-20 1-5mL/L； ProClin^TM300 0.5-2.5mL/L；硫酸庆大霉素 2-5mL/L; pH值8.0±0.2。

5.根据权利要求1所述的新型冠状病毒IgG抗体的酶联免疫法检测试剂盒，其特征在于： FITC标记新型冠状病毒抗原、辣根过氧化物酶标记鼠抗人IgG单克隆抗体的工作浓度均为0.01~0.5μg/mL。

6.根据权利要求1所述的新型冠状病毒IgG抗体的酶联免疫法检测试剂盒，其特征在于：抗FITC抗体酶标板的制备包括如下步骤，将抗FITC抗体用0.02-0.05M 磷酸盐缓冲液稀释至1~ 5μg/mL，同时加入到透明塑料酶标板中，37℃包被2-4小时；弃去孔内液体，用pH7.4 PBS缓冲液洗板，然后加入含质量浓度0.5-2％ BSA 的磷酸盐缓冲液封闭微孔板，37℃封闭2-4小时；弃去孔内液体，甩干后于37℃烘干4-12 小时；装入铝箔袋，加入干燥剂，封口，贴标签，储存于2~8℃。

7.根据权利要求1所述的新型冠状病毒IgG抗体的酶联免疫法检测试剂盒，其特征在于：辣根过氧化物酶标记鼠抗人IgG单克隆抗体的制备方法如下，

A、辣根过氧化物酶活化：

1）配制5-10mg/mL HRP溶液；

2）配制10-20 mg/mL 过碘酸钠NaIO₄溶液；

3）将步骤1）和步骤2）配制溶液按体积比1：(1-3)混匀，2-8℃避光反应0.5-2h；

4）配制浓度为10-40μL/mL的乙二醇水溶液，与步骤3）配制的溶液以相同体积混合，常温避光反应10-30min，活化即完成；

B、辣根过氧化物酶标记鼠抗人IgG单克隆抗体：

1）将待标记原料装入透析袋中，用0.02-0.1 M pH8.5-10 的碳酸盐缓冲液，透析0.5-2h；

2）将标记原料与活化的HRP按质量比1：（1-5）进行混合，之后用0.02-0.1 M碳酸盐缓冲液于2-8℃透析20-24h，期间换液2-3次；

3）配制浓度为2-5mg/mL的 NaBH₄水溶液，按1mgHRP加80μL配制好的NaBH₄水溶液的比例进行混合，并于2-8℃避光反应1-2h；

4）将上述步骤3）完成的标记液用0 .01-0.05M PBS 于2-8℃透析20-24h，加入等体积甘油，-20℃保存。