[发明专利]一种泛性型惰性载体沙门氏菌及其潜在应用

说明书

本发明公开了泛性型惰性载体沙门氏菌S9H及其潜在应用。泛性型惰性载体沙门氏菌S9H是由惰性载体菌S9使用LB固体和液体培养基连续在体外培养传代至第四十代获得，在工作浓度细菌数量下能与人源、鼠源、牛源、猪源和禽源（包括鸡、鸭、鹅、火鸡、鸽子、鹌鹑）血清和全血都不发生非特异性凝集反应，且具有携带和表面表达展呈人源、鼠源、牛源、猪源和禽源（包括鸡、鸭、鹅、火鸡、鸽子、鹌鹑）不同抗原因子的特性，可应用于简便快速检测人和多种类动物抗原或感染抗体的间接凝集试验检测方法的开发，改进和完善现有凝集抗原抗体检测的凝集试验的特异性、敏感性不佳的技术瓶颈，具有广泛的应用价值和市场前景。

技术领域

本发明属于生物医学技术检测领域，具体涉及一种泛性型惰性载体沙门氏菌及其潜在应用，该泛性型惰性载体沙门氏菌能在工作浓度细菌数量下与人源、鼠源、牛源、猪源和禽源(包括鸡、鸭、鹅、火鸡、鸽子、鹌鹑)不同遗传背景人和多种类动物血清和全血都不发生非特异性凝集反应。

背景技术

在疫病防控和流行病学研究中，血清学检测技术经常被用来诊断动物是否感染或携带某种特定病原体，其中凝集试验是医学、兽医临床一直广泛使用的一种经典型血清学快速诊断方法。凝集试验的原理是细菌颗粒性抗原在电解质存在和温度适宜的条件下，结合相应的血清抗体后，数分钟内出现凝集、凝聚现象，形成凝集小块或颗粒，仅需通过肉眼就能观察和判定反应结果。我们将参与反应的抗原称为凝集原，抗体称为凝集素。平板凝集试验是凝集反应中应用较为广泛的一种定性方法，将诊断血清(含有已知抗体)与待检菌悬液各滴一滴于洁净的透明玻璃平板上，等量(体积)轻轻混匀后，室温等待2分钟内，如出现肉眼可见的颗粒状凝集，即为阳性凝集反应，常用于细菌的鉴定和抗原的分型等。相反，也可用已知的诊断抗原来检测待检血清或全血中是否存在相应抗体，医学和兽医临床上常用于布氏杆菌感染诊断的玻板凝集反应和鸡白痢/禽伤寒沙门氏菌全血平板凝集试验等。

鉴于全血平板凝集试验一直作为现场快速检测方法，其操作简便——只需要现场采集的一滴全血加一滴凝集抗原轻轻晃动混匀玻板，且两分钟内通过肉眼观察判定反应结果；成本低廉——单份样本的直接检测的生产成本0.1元左右，且不需要任何额外的检测设备，更不需要昂贵的实验室仪器设备就能完成现场监测、检测。由于其上述优点，全血平板凝集试验一直广泛地应用在种禽生产中的种源性疾病监测检测，如在鸡白痢感染的检测和净化工作中，全血平板凝集试验一直作为代表性经典凝集试验在大规模鸡群中快速筛查鸡白痢感染(抗体)，由于其在鸡舍内圈栏旁检测的便捷性和实用性，具有无可比拟的临床应用优势，在美国国家家禽改良计划鸡白痢净化工作中发挥了重要作用。但是必须注意到全菌抗原复杂性的弊端和菌体O抗原靶向抗体的检测技术敏感性不佳瓶颈。事实上，该凝集抗原检测在实践应用中有一定的局限性，有报道凝集诊断抗原存在多种非特异性交叉反应，各批次检测结果不稳定和重复性结果不佳，反应中弱阳性结果难以判定和敏感性不佳出现漏检等多种因素影响检测结果，同时考虑到该菌体抗原寡糖，抗原性弱，且O抗原的O₁、O₉、O₁₂三种成分中，其中O₁₂出现三种变异株，鸡白痢沙门氏菌存在标准型、变异型和中间型，导致诊断抗原菌株与感染血清的特异匹配反应不强，尤其注意到菌体O抗原空间构象障碍，抗原展呈受限，存在O不凝集性，因而该凝集诊断法检测的敏感性不高，仅对感染成年鸡群检测效果相对敏感，通常需要在种鸡产蛋期间检测和净化，而对雏鸡感染抗体检测由于敏感性受限则可能存在较大漏检检测误差和各批次检测结果不一致。