[发明专利]一种用于结直肠癌检测的DNA甲基化试剂盒及使用方法、应用

权利要求书

1.一种用于结直肠癌检测的DNA甲基化试剂盒，其特征在于，包括检测或测量受试样品DNA中一种或多种特定基因的甲基化状态或水平的特异性引物和探针，所述特定基因为SEPT9、NDRG4和ACTB。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，用于检测SEPT9基因甲基化状态的特异性引物和探针选自下述三种特异性引物和探针组合中的任一种：特异性引物SEQ ID NO:1-2和探针SEQ ID NO:3、特异性引物SEQ ID NO:4-5和探针SEQ ID NO:6、特异性引物SEQ IDNO:7-8和探针SEQ ID NO:9。

3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，用于检测NDRG4基因甲基化状态的特异性引物和探针选自下述三种特异性引物和探针组合中的任一种：特异性引物SEQ ID NO:10-11和探针SEQ ID NO:12、特异性引物SEQ ID NO:13-14和探针SEQ ID NO:15、特异性引物SEQ ID NO:16-17和探针SEQ ID NO:18。

4.根据权利要求1-3任一所述的试剂盒，其特征在于，用于检测ACTB基因甲基化状态的特异性引物SEQ ID NO:19-20和探针SEQ ID NO:21。

5.根据权利要求1-4任一所述的试剂盒，其特征在于，所述特异性引物SEQ ID NO:1、2、4、5、7、8、10、11、13、14、16、17、19、20均经过硫代磷酸酯修饰，且在严格条件下与甲基化或非甲基化的目标基因区域杂交；

和/或，所述探针SEQ ID NO:3、6、9、12、15、18、21是基于TaqManTM设计的，且在严格条件下与甲基化或非甲基化的目标基因区域杂交。

6.根据权利要求1-5任一所述的试剂盒，其特征在于，所述SEPT9基因探针SEQ ID NO:3、6、9核苷酸序列5’端标记ABY，3’端标记QSY；

和/或，所述NDRG4基因探针SEQ ID NO:12、15、18核苷酸序列5’端标记JUN，3’端标记QSY；

和/或，所述ACTB基因探针SEQ ID NO:21核苷酸序列5’端标记VIC，3’端标记MGBNFQ。

7.根据权利要求1-6任一所述的试剂盒，其特征在于，所述特异性引物SEQ ID NO:1、2、4、5、7、8、10、11、13、14、16、17、19、20和所述探针SEQ ID NO:3、6、9、12、15、18、21的长度为10-50nt。

8.根据权利要求1-7任一所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还包含下述组成部分：dNTP混合溶液、MgCl₂溶液、DNA聚合酶、PCR反应缓冲液、PCR去离子水；

和/或，所述试剂盒中还包含下述组成部分：血浆游离DNA提取试剂和血浆游离DNA甲基化转化试剂；

和/或，所述血浆游离DNA甲基化转化试剂为亚硫酸氢盐；

和/或，所述受试样品DNA为完整基因组、无细胞DNA或循环肿瘤DNA。