[发明专利]日本血吸虫UDP-4基因的siRNA及其应用

说明书

本发明公开了日本血吸虫UDP‑4基因的siRNA，具体的siRNA为：SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示的核苷酸序列。本发明还公开了日本血吸虫UDP‑4基因的siRNA的应用。本发明日本血吸虫UDP‑4基因的siRNA，可明显抑制UDP‑4基因的转录，并能显著降低血吸虫感染小鼠的虫体数、肝荷卵数、每只雌虫的肝卵贡献率和虫卵孵化率，且对虫体的体被结构和生殖腺的细胞形态也造成了一定的病理影响，适用于制备防治和治疗血吸虫病的药物。

技术领域

本发明涉及分子生物学和生物医药技术领域，尤其涉及一种日本血吸虫UDP-4基因的siRNA 及其应用。

背景技术

血吸虫病是由血吸虫感染引起的一种人畜共患寄生虫病，是世界上最严重的寄生虫疾病之一，感染者超过2亿，有将近8亿人面临着感染的风险，每年造成数千人的死亡。目前该病的防治药物主要是吡喹酮，但该药不能阻止再次感染，且长期使用有产生耐药性的风险。因此，制备新的治疗血吸虫病的疫苗或药物迫在眉睫。

UDP-4在细菌和哺乳动物半乳糖代谢机制中介导UDP-葡萄糖和UDP-半乳糖的相互转化，参与细胞壁的合成，对锥虫和果蝇的生长发育起调控作用。该基因在日本血吸虫的免疫保护中也起一定作用，曹宇凡等（]曹宇凡,乔洪宾,刘萍萍,等.日本血吸虫重组抗原rSjGALE对小鼠的免疫保护效果分析[J].中国动物传染病学报,2013,21(03):51-56.）将其与206弗氏佐剂混合免疫小鼠，发现有一定的减卵和减孵化作用。

RNAi现象广泛存在于生物体中，由双链RNA介导，能特异性的降解目标mRNA，使其产生相应的表型缺失。RNAi具有以下几点鲜明的特征：RNAi具有很高的特异性，只降解与之序列相应的单个内源基因的mRNA；RNAi抑制基因表达具有很高的效率，表型可以达到缺失突变体表型的程度，而且相对很少量的siRNA分子就能完全抑制相应基因的表达，是以催化放大的方式进行的RNAi技术；siRNA不得短于21个碱基，并且长链siRNA也在细胞内被Dicer酶切割为21 bp左右的siRNA，并由siRNA来介导mRNA切割。而且大于30 bp的siRNA不能在哺乳动物中诱导特异的RNA干扰，而是细胞非特异性和全面的基因表达受抑和凋亡。该技术的广泛应用推进了科学和医学的进步。

发明内容

日本血吸虫UDP-4基因（UDP-4），其基因序列在GenBank中的编号为AY815833.1。在前期研究工作中本课题组通过qRT-PCR技术验证了UDP-4在正常发育雌虫与发育阻遏雌虫的表达，结果显示UDP-4在双性感染雌虫中表达较高，这与本实验室前期转录组学分析结果相符，这表明UDP-4在雌虫发育过程中起着一定的作用。研究UDP-4基因的功能及其在雌虫中的作用将对于我们从控制雌虫生殖发育及产卵的角度来控制血吸虫病奠定基础。

因此，本发明要解决的技术问题是提供一种日本血吸虫UDP-4基因的 siRNA，该siRNA 可抑制UDP-4基因的转录，可用于制备治疗血吸虫病的药物。

为了解决上述技术问题，本发明通过如下技术方案实现:

本发明首先提供一种干扰日本血吸虫UDP-4基因的siRNA。更具体地，所述的siRNA，其特征在于，其序列为SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示的核苷酸序列。

本发明还提供一种干扰日本血吸虫UDP-4基因的siRNA在制备治疗血吸虫病的药物中的应用。更优选地，所述siRNA的正义链序列为 SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列,反义链序列为SEQ ID NO.6所示的核苷酸序列。

本发明另外提供一种治疗血吸虫病的药物，其特征在于，所述药物的活性成分为抑制日本血吸虫UDP-4基因表达的 siRNA。 更优选地，所述siRNA的正义链序列为 SEQ IDNO.5所示的核苷酸序列,反义链序列为SEQ ID NO.6所示的核苷酸序列。