[发明专利]一种萝卜根肿病抗性鉴定的方法

说明书

本发明公开了一种萝卜根肿病抗性鉴定的方法。萝卜根肿病抗性功能标记RsNBS135C,由上游引物RsNBS135C‑F和下游引物RsNBS135C‑R扩增萝卜基因组DNA得到。该标记在萝卜基因组DNA中扩增所得的核苷酸序列于琼脂糖凝胶电泳后呈现特异性带型，能够快速、直接鉴定萝卜种质中目标抗性基因位点，有利于高效可靠地利用抗根肿病目标基因、加快根肿病抗性遗传改良进程。

技术领域

本发明属于蔬菜作物遗传育种领域，涉及一种萝卜根肿病抗性鉴定的方法。

背景技术

萝卜(Raphanus sativus L.)是原产于我国的重要十字花科根菜类蔬菜作物，营养丰富，耐储运、食疗价值高，深受人们喜爱。萝卜在我国栽培历史悠久(贾思勰(北魏)，齐民要术今释[M].中华书局2007)，种植面积广。

根肿病(Clubroot)主要发生在十字花科植物中，是由芸薹根肿菌(Plasmodiophora brassicae)引起的土传病害。病原体侵染感病植株致使根部异常膨大，造成蔬菜产品质量和商业价值下降，严重制约了十字花科作物产业化发展。由于根肿病病原物芸薹根肿菌的强生命力和高变异速度，近年来萝卜产量品质遭受这种土传病害危害的风险剧增。选育高抗品种是防治萝卜根肿病的最有效方法之一。然而，关于萝卜根肿病抗性鉴定评价工作报道较少，尚未有抗性相关基因被分离鉴定。

迄今已分离鉴定到80多个抗病基因(Sekhwal M K et al.Disease resistancegene analogs(RGAs)in plants.International journal of molecular sciences,2015,16(8):19248-19290)。已克隆的功能性抗病基因中，含有核苷酸结合位点(NBS)和富含亮氨酸重复(LRR)结构域的基因是数量最多的一类。NBS结构域因高度保守，被广泛应用于植物抗病基因的分类和识别(Lozano R et al.Identification and distribution of theNBS-LRR gene family in the Cassava genome.BMC genomics,2015,16(1):360.)。LRR结构域是一段亮氨酸重复序列，具有病原菌识别作用并参与蛋白-蛋白之间的相互作用(Martin G B,Bogdanove A J,Sessa G.Understanding the functions of plantdisease resistance proteins[J].Annual review of plant biology,2003,54(1):23-61.)。

随着萝卜全基因组测序工作的完善(Kitashiba et al.Draft sequences of theradish(Raphanus sativus L.)genome.DNA Research,2014,21(5):481-490.)，可以从萝卜全基因组水平进行NBS-LRR类抗病候选基因序列鉴定，使得从抗病候选基因中分离鉴定出根肿病抗性相关基因成为可能。开发萝卜根肿病抗性基因相应功能标记，进而运用标记辅助选择技术可有效提高高抗性品种遗传改良效率。

发明内容

本发明的主要目的在于筛选获得萝卜根肿病抗性基因位点有效功能标记；并高效应用于种质材料根肿病抗性鉴定，以提高抗性选择与抗性遗传改良效率。

本发明的另一目的是提供萝卜根肿病抗性功能标记RsNBS135C的特异性引物。

本发明的又一目的是提供萝卜根肿病抗性功能标记RsNBS135C的特异性引物的应用。

为了实现上述目的，本发明采用了以下技术方案。

萝卜根肿病抗性功能标记RsNBS135C,由上游引物RsNBS135C-F和下游引物RsNBS135C-R扩增萝卜基因组DNA得到；所述的上游引物RsNBS135C-F的核苷酸序列如SEQID NO.1所示,下游引物RsNBS135C-R的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。