[发明专利]一种提高脐带间质干细胞抗氧化能力的培养方法

说明书

本发明公开了一种提高脐带间质干细胞抗氧化能力的培养方法，该方法包括如下步骤：S1、向无动物成分来源添加的MSCBM培养基中加入一定量的烟酰胺单核苷酸，配制得到NMN的浓度为2～10uM的含NMN的培养基；S2、采用上述含NMN的培养基对脐带间充质干细胞冲悬，得到细胞悬液；S3、调整上述细胞悬液中的细胞密度，并将所述细胞悬液接种于细胞培养设备中且置于培养箱中培养进行扩增培养。本发明通过选用NMN的浓度为2～10uM的含NMN的培养基来培养脐带间质干细胞的培养方法，有效的增加脐带间充质干细胞细胞内和分泌到细胞外的抗氧化能力相关酶活性，从而提高了脐带间充质干细胞的抗氧化能力。

技术领域

本发明属于脐带间质干细胞培养技术领域，具体涉及一种提高脐带间质干细胞抗氧化能力的培养方法。

背景技术

脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSCs)是具有自我更新和多向分化潜能的间充质干细胞，其来源于人脐带华通氏胶组织。由于脐带间充质干细胞及其分泌的生物活性酶具有抗氧化作用，从而发挥抑制细胞凋亡的功能。且脐带间充质干细胞在体外培养易扩增并可以在培养上清和细胞裂解液中收获丰富的生物活性酶，使其在临床治疗方面特别有应用前景，如可应用于缺氧损伤、慢性炎症、退行性疾病及受损组织的再生修复等，所以脐带间充质干细胞抗氧化能力的增强将更有利于临床治疗的应用。

由于脐带间充质干细胞体外扩增时，会产生细胞活性下降、抗氧化能力减弱的现象，从而限制了大规模市场化应用的可行性。找到保持和促进脐带间充质干细胞抗氧化能力的培养方法，使其更适合应用于临床是当前研究的新热点。

发明内容

有鉴于此，本发明目的在于提供一种提高脐带间质干细胞抗氧化能力的培养方法，解决了现有技术培养得到的脐带间质干细胞的抗氧化能力不佳的问题。

为了解决上述问题，本发明采用的技术方案是：一种通过添加NMN提高脐带间质干细胞抗氧化能力的培养方法，该方法包括如下步骤：

S1、向无动物成分来源添加的MSCBM培养基中加入一定量的烟酰胺单核苷S1、向无动物成分来源添加的MSCBM培养基中加入一定量的烟酰胺单核苷酸，配制得到NMN的浓度为2～10uM的含NMN的培养基；

S2、采用所述S1制得的含NMN的培养基对P2至P8代的脐带间充质干细胞冲悬，得到细胞悬液；

S3、调整所述S2得到的细胞悬液中的细胞密度，并将所述细胞悬液接种于细胞培养设备中且置于培养箱中培养进行扩增培养。

优选地，所述S1中，所述含NMN的培养基中NMN的浓度为2uM，5uM或10uM。

优选地，所述S3中，所述细胞悬液中的细胞密度为1×10⁶～5×10⁶个/mL。

优选地，所述S3中，所述细胞培养设备为细胞培养板或细胞培养瓶，接种于所述细胞培养板或细胞培养瓶中的细胞密度为0.6～1.2×10⁴个/cm²。

优选地，所述S3中，所述培养箱为CO₂培养箱，所述培养时的温度为35℃～38℃。

优选地，所述CO₂培养箱中CO₂的体积百分浓度为4.5～5.5％。

优选地，在执行S2之间还包括：向所述S1制得的NMN培养基中加入白藜芦醇；所述白藜芦醇和NMN的质量比范围为(5～20):100；

优选地，所述白藜芦醇与NMN的质量比为5:100，10:100或20:100。