[发明专利]一种新冠病毒核酸检测试剂盒、制备方法及应用

权利要求书

1.一种新冠病毒核酸检测试剂盒，其特征在于，

包括引物探针混合物、逆转录酶、耐热DNA聚合酶、dNTPs、镁离子、PCR缓冲液、超纯水和待测RNA模板，所述引物探针混合物包括根据新冠病毒核酸ORF1ab基因序列合成一对特异的第一外侧引物和一对特异的第一内侧引物以及TaqMan探针P5、根据新冠病毒核酸N基因序列合成一对特异的第二外侧引物和一对特异的第二内侧引物以及TaqMan探针P10、根据新冠病毒核酸E基因序列合成一对特异的第三外侧引物和一对特异的第三内侧引物以及TaqMan探针P15、根据ACE2基因序列合成一对特异的内对照引物和TaqMan探针ACE2TM，所述一对特异的第一外侧引物包括外侧上游引物P1和外侧下游引物P2；所述一对特异的第一内侧引物包括内侧上游引物P3和内侧下游引物P4；所述一对特异的第二外侧引物包括外侧上游引物P6和外侧下游引物P7；所述一对特异的第二内侧引物包括内侧上游引物P8和内侧下游引物P9；所述一对特异的第三外侧引物包括外侧上游引物P11和外侧下游引物P12；所述一对特异的第三内侧引物包括内侧上游引物P13和内侧下游引物P14；所述内对照引物包括上游引物ACE2F和下游引物ACE2R；

所述外侧上游引物P1的引物序列为ACAACTTGTGCTAAT；

所述外侧下游引物P2的引物序列为CATCAGCTGACTGAAG；

所述内侧上游引物P3的引物序列为AAAACCCTGTGGGTTTTACACTT；

所述内侧下游引物P4的引物序列为AAAAGGGTTCGCGGAGTTGAT；

所述TaqMan探针P5的引物序列为FAM-CCTTTCCACATACCGCAGAC-TAMARA；

所述外侧上游引物P6的引物序列为CAGTTCAAGAAATTCAACT；

所述外侧下游引物P7的引物序列为CAGTTTGGCCTTGTTGT；

所述内侧上游引物P8的引物序列为AAAAGGAACTTCTCCTGCTAGAAT；

所述内侧下游引物P9的引物序列为AAAACATTTTGCTCTCAAGCTGGT；

所述TaqMan探针P10的引物序列为FAM-CTTGCTTTGCTGCTGCTTGAC-TAMARA；

所述外侧上游引物P11的引物序列为GTTAATAGCGTACTTCTTT；

所述外侧下游引物P12的引物序列为CAAGACTCACGTTAACAAT；

所述内侧上游引物P13的引物序列为AAAACTTGCTTTCGTGGTATTCTTG；

所述内侧下游引物P14的引物序列为AAAAGCAGCAGTACGCACACAAT；

所述TaqMan探针P15的引物序列为FAM-CTAGCCATCCTTACTGCGCTTC-TAMARA；

所述上游引物ACE2F的引物序列为GGACTCTGCCATTTACTTAC；

所述下游引物ACE2R的引物序列为CCAACTATCTCTCGCTTCAT；

所述TaqMan探针ACE2TM的引物序列为ROX-CATCCACCTCCACTTCTCTAAC–TAMARA。

2.如权利要求1所述的新冠病毒核酸检测试剂盒，其特征在于，

所述外侧上游引物P1、P6、P11、所述外侧下游引物P2、P7、P12、所述内侧上游引物P3、P8、P13、所述内侧下游引物P4、P9、P14、所述TaqMan探针P5、P10、P15、所述上游引物ACE2F、所述下游引物ACE2R和所述TaqMan探针ACE2TM的终浓度均为0.2-0.4umol/L。

3.如权利要求2所述的新冠病毒核酸检测试剂盒，其特征在于，

所述逆转录酶的终浓度为1-3U/50ul，所述耐热DNA聚合酶的终浓度为1-3U/50ul，所述dNTPs的终浓度为0.2-0.5mmol/L，所述镁离子的终浓度为1.5-3.5mmol/L，所述PCR缓冲液的终浓度为1-1.5XPCR。

4.如权利要求3所述的新冠病毒核酸检测试剂盒，其特征在于，

1XPCR缓冲液包括50mmol/L KCl、PH值为8.3浓度为10mmol/L的Tris.HCl、0.01％明胶。