[发明专利]一种基于催化发夹组装-动态光散射技术的端粒酶活性检测方法

权利要求书

1.一种非疾病诊断目的的基于催化发夹组装-动态光散射技术的端粒酶活性检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、端粒酶提取：利用CHAPS法提取待测样品中的端粒酶，得到待测端粒酶提取物；

S2、催化发夹组装产物获得：将待测端粒酶提取物与端粒酶引物在延伸反应缓冲液中进行延伸反应，得到延伸产物，然后在延伸产物中加入摩尔浓度为2-6nM的金纳米粒子探针，在温度为25-40℃进行催化发夹组装反应，得到催化发夹组装产物；

S3、动态光散射检测：催化发夹组装产物通过动态光散射检测得到信号；

所述步骤S2中的金纳米粒子探针包括发夹探针H1修饰的金纳米粒子AuNPs-H1探针和发夹探针H2修饰的金纳米粒子AuNPs-H2探针；

所述发夹探针H1的序列为5`-SH-(CH<sub>2</sub>)<sub>6</sub>-CCC TAA CCC TAA CTC TGC CTA GGG TAC TGCAGA GTT AGGG-3`；所述发夹探针H2的序列为5`-SH-(CH<sub>2</sub>)<sub>6</sub>-CTC TGC AGT ACC CTA GGC AGAGTT AGG GTA CTG-3`。

2.根据权利要求1所述的非疾病诊断目的的基于催化发夹组装-动态光散射技术的端粒酶活性检测方法，其特征在于，所述步骤S2中的端粒酶引物序列为：5`-AAT CCG TCG AGCAGA GTT-3`；所述延伸产物序列为：5`-AAT CCG TCG AGC AGA GTT AGGG TTA GGG-3`。

3.根据权利要求1所述的非疾病诊断目的的基于催化发夹组装-动态光散射技术的端粒酶活性检测方法，其特征在于，所述步骤S2中的金纳米粒子探针的制备方法包括以下步骤：

A、分别在发夹探针H1和发夹探针H2中添加磷酸三（2-氯乙基）酯，置于25-30℃下处理0.5-3 h后得到产物H1`、H2`，分别加入金纳米粒子溶液并室温孵育12-18h得到产物AuNPs-H1`和AuNPs-H2`；

B、在上述产物AuNPs-H1`和AuNPs-H2`中分别加入终浓度为0.1 M的氯化钠溶液，进行盐老化处理25-50 h后，在4℃条件下以13800 rpm的转速离心15-30分钟，弃上清后，加入PBS缓冲液洗涤2-4次得到油状沉淀物，分别加入PBS缓冲液，pH = 7.0-7.4，0.1M NaCl溶解即得金纳米粒子探针AuNPs-H1和AuNPs-H2。

4.根据权利要求3所述的非疾病诊断目的的基于催化发夹组装-动态光散射技术的端粒酶活性检测方法，其特征在于，所述步骤A中产物H1`、H2`与金纳米粒子的摩尔比为100-200:1。

5.根据权利要求1所述的非疾病诊断目的的基于催化发夹组装-动态光散射技术的端粒酶活性检测方法，其特征在于，所述步骤S2中延伸反应的温度为25-40℃，反应时间为0.5-3h。

6.根据权利要求1所述的非疾病诊断目的的基于催化发夹组装-动态光散射技术的端粒酶活性检测方法，其特征在于，所述步骤S3中的动态光散射检测的温度为25-30℃，散射角为90-120°，红色激光波长为610-650nm，激光功率为3-6mW。

7.根据权利要求1所述的非疾病诊断目的的基于催化发夹组装-动态光散射技术的端粒酶活性检测方法，其特征在于，所述待测样品选自膀胱癌细胞，人乳腺癌细胞或人宫颈癌细胞，所述膀胱癌细胞，人乳腺癌细胞或人宫颈癌细胞的细胞浓度的检测下限是3个细胞/μL。