[发明专利]一种利用木醋液对土壤中抗生素抗性基因的削减方法及应用

权利要求书

1.一种木醋液在抗生素抗性基因污染土壤削减中的应用，其特征在于，

所用木醋液制备包括如下步骤：

1)厌氧慢速热解法制备木醋原液WV：将植物原料干燥至恒重，采用热解炭化炉热解植物原料制备木醋液，热解温度350℃-550℃，热解时间3h-6h，热解过程中所产生的气体经过冷凝，得到棕黑色且有刺鼻性气味的液体，然后在黑暗中静置3-6个月，取中间液体过微孔滤膜，即得木醋原液WV；

2)常压蒸馏法精制木醋原液WV：常压状态下，设置15℃-98℃低温温度段，加热蒸馏装置，采集该温度段的产物，得到精馏组分为15℃-98℃低温度段精馏组分F1，木醋原液WV或精馏组分F1分别作为所需木醋液；

具体的，将木醋原液WV或精馏组分F1分别作为土壤改良剂施用于抗生素抗性基因污染土壤中；

其中，应用木醋原液WV处理降低磺胺类、氨基糖苷类或大环内酯类抗生素抗性基因sul1，sul2，ermF,ermB，aadA5或strA，在根际和非根际土壤中的绝对丰度；应用木醋原液WV或精馏组分F1，处理降低tetO类抗生素抗性基因，在根际和非根际土壤中的绝对丰度；应用木醋原液WV，处理去除根际和非根际土壤的可移动遗传原件；

可移动遗传原件为intI1或Tn916/1545；

木醋原液WV及其精馏组分F1的有机酸和酚类总含量为50wt％-85wt％；木醋原液WV中，有机酸含量为30wt％-50wt％，酚类含量为30wt％-50wt％；精馏组分F1中，有机酸含量为25wt％-30wt％，酚类含量为20wt％-27wt％；

应用的实验方法包括：①以蔬菜作为受试植物，将木醋原液WV及其精馏组分F1分别按比例添加至盆栽土壤，培养65d后采集根际和非根际土壤，②通过测定不同处理组根际和非根际土壤抗生素抗性基因和可移动遗传原件丰度，分析抗生素抗性基因和可移动遗传原件之间的相关性，③分别比较木醋原液WV及其精馏组分F1添加下根际和非根际土壤抗生素抗性基因变化的差异性，④分别得出木醋原液WV及其精馏组分F1对土壤抗生素抗性基因的削减评价。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，将木醋原液WV以及精制所得精馏组分F1施用于菌液培养基中，测定各类木醋液的抑菌性，按如下公式计算抑菌率：

抑菌率(％)＝(处理组抑菌圈直径–对照组抑菌圈直径)/处理组抑菌圈直径×100％；和/或

将木醋原液WV及其精馏组分F1分别通过高效气相色谱-质谱联用测定进行组分分析，然后用每个峰谱的面积除以所有峰的总面积获得相对丰度面积计算每种物质的相对含量。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，在步骤①中，木醋原液WV及其精馏组分F1添加比例为木醋原液WV 140μL kg^-1-180μL kg^-1，精馏组分F1 100μL kg^-1-120μL kg^-1的比例，稀释200倍-500倍后添加至土壤；且按播种前、播种后15d和播种后30d分别按比例添加三次。