[发明专利]基于谷胱甘肽、谷胱甘肽还原酶和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的电化学逻辑门有效
| 申请号： | 202010707335.2 | 申请日： | 2020-07-10 |
| 公开（公告）号： | CN111879829B | 公开（公告）日： | 2022-10-14 |
| 发明（设计）人： | 张青青;胡宇芳;詹甜玉 | 申请（专利权）人： | 宁波大学 |
| 主分类号： | G01N27/27 | 分类号： | G01N27/27;G01N27/327;G01N27/30 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 315211 浙江省*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 基于 谷胱甘肽 还原酶 葡萄糖 磷酸 脱氢酶 电化学 逻辑 | ||
1.基于谷胱甘肽、谷胱甘肽还原酶和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的电化学逻辑门，具体制备步骤如下：
(1)GSH-Ag(I)CP的制备
依次取1～10μL浓度为0.1～20mM的硝酸银水溶液、1～10μL浓度为0.1～20mM谷胱甘肽水溶液，混合均匀后加入磷酸缓冲溶液配成50～120μL的溶液，将溶液在25～40℃下缓缓震荡8～17min，即得到GSH-Ag(I)CP，使用前将GSH-Ag(I)CP溶液与50～120μL 0.02％wtNafion溶液混合均匀，静置5～20min；
(2)电化学生物传感器的制备
a.将玻碳电极在麂皮上依次用粒径0.3μm、0.05μm的三氧化二铝粉末抛光0.5～5min，抛光后将电极置于超声清洗器中用超纯水超声清洗1～5min，然后用N2吹干，记为GCE；
b.利用循环伏安法，设置电位范围为-1.5～0.5V、扫速5～20mV/s将0.7～2.4mg/mL石墨烯GO醋酸分散液电沉积到裸玻碳电极上得到GO/GCE；然后取5～15μL步骤(1)中溶液滴涂于GO/GCE上，室温下静置20～60min，用超纯水缓缓冲洗电极，记为CP/GO/GCE；
(3)逻辑门的构建
100μL总体积的反应液包括：葡萄糖6-磷酸1～20mM，氧化态的还原型辅酶II0.01～10mM，葡萄糖-6-磷酸脱氢酶0.5～30U，GSSG 1～50mM和GSR 0.5～30U，37℃下反应2～10min，将该反应液代替步骤(1)中的GSH实现GSH-Ag(I)CP的制备，其余步骤同(1)和步骤(2)；改变输入信号和输出信号，实现逻辑门的设计。
2.根据权利要求1所述的基于谷胱甘肽、谷胱甘肽还原酶和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的电化学逻辑门，其特征在于，步骤(1)中磷酸缓冲溶液由Na2HPO4/NaH2PO4配制，浓度为10M，pH＝7.0。
3.根据权利要求1所述的基于谷胱甘肽、谷胱甘肽还原酶和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的电化学逻辑门，其特征在于，步骤(2)中醋酸分散液pH＝5.0。
4.根据权利要求1所述的基于谷胱甘肽、谷胱甘肽还原酶和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的电化学逻辑门，其特征在于：所有逻辑门都以H2O2电化学信号为信号输出，不同逻辑门具有不同的输入信号：①以Ag(I)为信号输入构建“YES”逻辑门；②以GSH为信号输入构建“YES”逻辑门；③以Ag(I)和GSH为信号输入构建“AND”逻辑门；④以GSSG和NADPH为信号输入构建“AND”逻辑门；⑤以NADP+和GSSG为信号输入构建“AND-AND”逻辑门；⑥以NADP+、GSSG和Ag(I)为信号输入构建“AND-AND-AND”逻辑门。
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