[发明专利]一种不同菌种对石油烃降解能力的比较方法及其应用

权利要求书

1.一种不同菌种对石油烃降解能力的比较方法，其特征在于，其步骤如下：

(1)菌种的活化培养：选取能降解石油烃的菌种，分别投入100mL灭菌的LB液体培养基中，并添加1％的原油，富集培养3-7d，制得富集培养的菌液；

(2)菌种的驯化培养：分别在以葡萄糖、十六烷、菲和石油烃混合物为单一碳源和能源的无机盐培养基中加入1％步骤(1)制得的富集培养的菌液，36℃，120rpm，培养3-7d；

(3)菌悬液配制：取50mL步骤(2)制得的菌液于灭菌的离心管，4000转，离心10min，弃去上清液，用灭菌的生理盐水50mL悬浮沉淀物后再次离心，如上所述洗涤3次后，用紫外分光光度计测定菌悬液浓度；

(4)菌种生长曲线：用酶标仪连续测定菌液的OD₆₀₀，绘制菌液的生长曲线，确定不同菌种对石油烃降解能力。

2.如权利要求1所述的一种不同菌种对石油烃降解能力的比较方法，其特征在于，所述步骤(1)中的LB液体培养基的成分为胰蛋白胨：10g/L，酵母提取物：5g/L，NaCl：10g/L，pH值：7.0-7.4。

3.如权利要求1所述的一种不同菌种对石油烃降解能力的比较方法，其特征在于，所述步骤(2)中的无机盐培养基的成分为KH₂PO₄：1.0g/L，K₂HPO₄：1.0g/L，NH₄NO₃：1.0g/L，MgSO₄·7H₂O：0.2g/L，FeCl₃：0.05g/L，CaCl₂·2H₂O：0.02g/L，pH：6.8-7.2。

4.如权利要求1所述的一种不同菌种对石油烃降解能力的比较方法，其特征在于，所述步骤(3)中的菌悬液配制，其特征在于，实验操作均在超净工作台内或酒精灯附近完成，确保无空气中的杂菌污染，洗涤所使用的生理盐水需灭菌，移取菌悬液的注射器需灭菌，测定菌悬液浓度所使用的具塞比色皿使用前浸泡于70％的乙醇溶液中，以无菌的生理盐水为空白参比，测定洗涤后的菌液浓度，将菌悬液的OD₆₀₀调至相一致。

5.如权利要求1所述的一种不同菌种对石油烃降解能力的比较方法，其特征在于，所述步骤(4)中菌液OD₆₀₀的测定：在超净工作台内，用8道移液器分别移取5μL的葡萄糖、十六烷、菲和石油烃混合物于无菌96孔板，继续向上述96孔板中移取160μL的BH培养基、15μL的菌悬液和37.5μg/mL的2,6-DCPIP试剂20μL，将96孔板置于恒温培养箱中培养，用酶标仪在0h，4h，8h，12h，16h，20h，24h，48h，60h和72h测OD₆₀₀，并观察对应时刻96孔板的颜色变化。

6.如权利要求1所述的一种不同菌种对石油烃降解能力的比较方法的应用，其特征在于，该方法应用于比较不同菌种对其他含碳有机物污染物降解能力。