[发明专利]一种腺苷脱氨酶测定试剂盒

说明书

一种腺苷脱氨酶测定试剂盒，由彼此独立的试剂R1和试剂R2组成；所述试剂R1的组分包括：缓冲液、防腐剂、保护剂、抗干扰剂、表面活性剂、反应增强剂、过氧化物酶、嘌呤核甘磷酸化酶、黄嘌呤氧化酶、4‑氨基安替比林和水；所述试剂R2的组分包括：缓冲液、保护剂、反应增强剂、防腐剂、腺苷、色原物质和水。本发明分析灵敏度高，线性可高达300U/L以上，重复性好，抗干扰能力强。

技术领域

本发明涉及医学及生物化学技术领域，具体是一种测定腺昔脱氨酶的试剂盒。

背景技术

腺昔脱氨酶(adenosine deaminase，ADA)是瞟岭核昔代谢中重要的酶类，是一种与机体细胞免疫活性有重要关系的核酸代谢酶。其活性是反映肝损伤的敏感指标，可作为肝功能常规检查项目之一，与ALT或GGT等组成肝酶语能较全面地反映肝脏病的酶学改变。血清中的ADA活性测定可用于:判断急性肝损伤及残留病变:协助诊断慢性肝病:有助于肝纤维的诊断:有助于黄症的鉴别。此外，ADA活性缺乏与重症联合免疫缺陷病(SC1D)有关，作为核酸代谢重要的酶类，ADA缺乏可导致核酸代谢障碍，影响到胸腺的发育，从而引起免疫功能缺陷。脑脊液ADA检测可作为中枢神经系统疾病诊断和鉴别诊断的重要指标。ADA在良恶性难辨的渗出液鉴别诊断上也具有重要价值。因此，测定血液、体液中的ADA及其同工酶水平对这些疾病的鉴别、诊断、治疗及免疫功能的研究日趋受到临床重视。

近十几年来，随着对ADA的深入研究，检测方法也不断发展。目前比色法己发展了五代。

第一代ADA测试：ADA将腺苷(Adenosine)脱氨产生次黄苷(Inosine)和氨(NH3)。通过动态测量腺苷265nm处吸光度下降的速度，测算ADA的活性大小。但是该法高底物浓度造成吸光度过高，仅适用于腺苷浓度低于40.00μmol/L。如此低的底物浓度达不到底物饱和要求，造成ADA活性检测失真。因此，该法不适用于临床应用。

第二代ADA测试:原理为腺苷脱氨酶催化腺嘌呤核苷水解，产生次黄嘌呤核苷和氨。然后用Berthelot显色反应测定反应过程中产生氨的量，从而计算血清ADA活性单位。该法所需试剂易配制，仪器简单，但灵敏度低，易受外源性NH3影响，空白过高，不能直接测定红细胞ADA活性。

基于同样的原因，ADA偶联谷氨酸脱氢酶(Glutamate Dehydrogenase，GLDH)反应通过测量340nm处NADPH(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate reducedform，还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸，还原型辅酶II)吸光度下降的速度来计算ADA活性。该法也因血清含氨干扰，以及测试系统中过高的NADPH造成非特异性氧化，而不能准确计算ADA活性。

第三代ADA测试：通过ADA偶联嘌呤核苷磷酸化酶(Purine nucleosidephosphorylase，PNP)和黄嘌呤氧化酶(Xanthine Oxidase，XOD)反应连续监测法。通过测量293nm处尿酸盐吸光度上升的速度来测算ADA活性。但是，293nm时血清吸光度太高，造成临床应用不便。

第四代ADA测试：通过ADA偶联PNP、XOD、过氧化氢酶(Ca talase)和醛脱氢酶(Aldehyde dehydrogenase)，借助过氧化氢(H₂O₂)反应测量334nm处NADPH吸光度上升的速率来测算ADA活性。该法克服了以往ADA测试的困难，但是，该法剂成本高，阻碍实际临床使用。