[发明专利]一种辣椒高效遗传转化及植株再生方法

权利要求书

1.一种辣椒高效遗传转化及植株再生方法，包括以下步骤：

S1.载体构建；

S2.转化农杆菌及扩繁备用；

S3.制备Flamingo bill外植体并进行预培养；

其特征在于，还包括以下步骤：

S4. 侵染：

S41.将预培养好的Flamingo bill外植体子叶及伤口下侧茎秆上环切2道环切口，最上端一道环切口距离外植体伤口部分的距离为3mm，相邻两环切口间距为1-2mm；

S42.取农杆菌于平皿中，把MS液体培养基进行稀释，并加入乙酰丁香酮后与平皿中的农杆菌混合，得到侵染液；

S43.将经S41预处理好的Flamingo bill外植体放入侵染液中侵染，侵染时，使Flamingo bill外植体倒置放入侵染液，使侵染液依次没过外植体子叶、伤口部分以及环切口，侵染20～30min；

S5.愈伤诱导与共培养

侵染完成后，将 Flamingo bill外植体稍加晾干水分，并在环切口上涂抹细胞分裂素和生长素混合液后，将 Flamingo bill外植体转至液体共培养基共培养3～4天，液体共培养基液面低于环切口，期间每隔1-2天在环切口处涂抹细胞分裂素和生长素混合液1次；

S6.新茎尖形成及伸长：

共培养结束后洗菌，然后将Flamingo bill外植体转至MS固体培养基中，且只让Flamingo bill外植体根系接触培养基，培养14～20天，新生植株便会从Flamingo bill外植体伤口长出并逐步伸长，同时环切口处也会逐渐膨大形成愈伤组织；

S7.新生植株的切割及转移：当Flamingo bill外植体上的新生植株伸长至1.5～2.5cm时，将新生植株从其基部切割下，切割新生植株时，从环切口愈伤组织处倾斜切割环切口愈伤组织分成两部；

S8. 嫁接与筛选：将新生植株环切口处的愈伤组织部位嫁接到无菌辣椒植株母体上，嫁接成功后，进行嫁接苗筛选后可直接移栽。

2.根据权利要求1所述一种辣椒高效遗传转化及植株再生方法，其特征在于：步骤S5所述共培养基为无菌的液体MS 基本培养基，且Flamingo bill外植体在黑暗条件下共培养3～4天。