[发明专利]一种柔嫩艾美耳球虫重组多肽疫苗VNQS的制备及其在抗鸡球虫病中的应用方法有效
| 申请号： | 202010754556.5 | 申请日： | 2020-07-30 |
| 公开（公告）号： | CN111840530B | 公开（公告）日： | 2023-06-20 |
| 发明（设计）人： | 戚南山;孙铭飞;廖申权;吕敏娜;吴彩艳;李娟;林栩慧;胡俊菁;蔡海明;肖文婉;于林增;张健騑 | 申请（专利权）人： | 广东省农业科学院动物卫生研究所 |
| 主分类号： | A61K39/012 | 分类号： | A61K39/012;A61K39/39;A61P33/02;C07K14/455;C12N15/30;C12N15/85 |
| 代理公司： | 上海众象合一知识产权代理有限公司 31395 | 代理人： | 姜微微 |
| 地址： | 510000 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 柔嫩 艾美耳球虫 重组 多肽 疫苗 vnqs 制备 及其 球虫病 中的 应用 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种柔嫩艾美耳球虫重组多肽疫苗VNQS的制备方法，其特征在于：制备方法包括：
步骤一，VNQS编码基因的克隆，根据鸡球虫基因序列设计上游引物SEQ ID NO:3和下游引物SEQ ID NO:4,进行PCR扩增、电泳产物经1%琼脂糖凝胶电泳分析，将PCR产物纯化回收后连接转化得到序列全长为1452bp的VNQS,其序列为SEQ ID NO:1；
步骤二，VNQS蛋白的制备，针对目的基因设计上游引物SEQ ID NO:7和下游引物SEQ IDNO:8，通过基因扩增，用DNA胶回收试剂盒回收酶切后的目的片段，然后进行表达载体的处理以及酶切载体与酶切片段的连接构建VNQS重组原核表达质粒，再通过连接产物转化、菌落PCR法鉴定转化克隆，最后采用质粒小提试剂盒进行质粒小提以及进行VNQS在表达菌中的诱导表达纯化得到VNQS蛋白；
步骤三，VNQS重组蛋白的乳化，取纯化后所得的VNQS重组蛋白与弗氏佐剂（FCA）按照1：1的比例混匀，用7号针头注射器反复抽吸至滴于水上5min内不扩散为止，即得到柔嫩艾美耳球虫重组多肽疫苗VNQS。
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