[发明专利]一种褐杆菌菌株及其筛选方法和应用

说明书

本发明涉及一种褐杆菌菌株，还涉及该褐杆菌菌株的筛选方法及其应用，上述褐杆菌菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为：CGMCC No.19893，本发明中的褐杆菌菌株能有效抑制弧菌的生长，尤其是抑制副溶血弧菌和哈维弧菌，能显著降低人工侵染的弧菌对对虾的致死率，应用至对虾养殖中能显著提高对虾的成活率。本发明的褐杆菌菌株筛选方法中，根据褐杆菌在2216E琼脂培养基上和2216E液体培养基中均呈褐色的特点，可精确定位到目标菌落，进一步通过病原抑菌能力测试，能快速筛选出其中具有抗病潜力的褐杆菌菌株。

技术领域

本发明涉及为生物技术领域，尤其涉及一种褐杆菌菌株及其筛选方法和应用。

背景技术

对虾养殖是我国水产养殖业中最具代表性的产业之一。近年来，传染性疾病在对虾养殖中肆虐流行而且愈演愈烈，给对虾养殖业带来了巨大的经济损失，严重地制约了该产业的健康发展。在传统养殖模式中，抗生素的应用被作为预防和控制对虾疾病发生的主要方法，但抗生素的滥用不仅会破坏养殖生态系统的平衡，而且会造成环境污染和食品安全等问题。益生菌作为抗生素类药物的主要替代品之一，具有无毒副、无残留等诸多优点，在对虾养殖病害防控中受到了越来越多的青睐。虽然目前市售的水产益生菌种类繁多，但它们大多分离自陆生环境，这些菌株在水产养殖中的作用效果往往不显著，难以支撑集约化对虾养殖的可持续发展，因此亟需开发新型水产益生菌。

对虾肠道本身是筛选对虾益生菌的重要资源，从对虾肠道中筛选的益生菌能更好地适应肠道环境，进而确保发挥益生作用。红杆菌科是凡纳滨对虾各个生长阶段的肠道核心及优势类群，该科的多个细菌属产吲哚衍生物、靛青素、色胺酮和tropodithietic acid(TDA)等抑制病原菌的生物活性物质。其中TDA是褐杆菌属(Phaeobacter)等分泌的一种通过破坏细菌细胞壁的质子动势杀死病原菌的抗生素，该物质已被证实能抑制鳗弧菌(V.anguillarum)、副溶血弧菌(V.parahaemolyticus)、哈维弧菌(V.harveyi)等多种水产动物条件致病菌的生长。多项研究已经证明，褐杆菌属细菌在鳕鱼、鲍鱼和凡纳滨对虾等养殖的抗病中具有较大的益生潜力。因此，从对虾肠道中分离褐杆菌属菌株对对虾养殖的病害防控具有重要意义。

发明内容

本发明所要解决的第一个技术问题是针对现有技术而提供一种褐杆菌菌株，该褐杆菌菌株对弧菌活性具有抑制作用，尤其是副溶血弧菌和哈维弧菌。

本发明所要解决的第二个技术问题是针对现有技术而提供一种上述褐杆菌菌株的筛选方法。

本发明所要解决的第三个技术问题是针对现有技术而提供一种上述褐杆菌菌株在对虾养殖中的应用。

本发明解决上述第一个技术问题所采用的技术方案为：一种褐杆菌菌株，命名为G18，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为：CGMCC No.19893。

进一步，所述褐杆菌菌株为革兰氏阴性菌，且该菌株在2216E琼脂培养基上30℃培养24h，菌落呈褐色，而在2216E液体培养基中振荡培养12h，菌液呈褐色。

本发明为解决第二个技术问题所采用的技术方案为：一种如上所述的褐杆菌菌株的筛选方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)分离筛选潜在目标菌株：

取新鲜虾肠道，研磨后加入无菌的磷酸缓冲液，振荡均匀后置于25～35℃摇床振荡培养30～60min；

取适量培养后的菌液，梯度稀释后涂布于2216E琼脂培养基上，然后将该培养基转移至25～35℃的培养箱中，倒置培养3～7d；

挑取褐色的菌落，反复2次划线接种于新的2216E琼脂培养基上，挑取单菌落，加入到浓度为20％～30％的甘油中，于-80℃保存，作为待测菌株；

(2)弧菌抑制能力试验：