[发明专利]一种牙本质发育不全的点突变动物模型构建方法及其应用

权利要求书

1.一种DGI疾病动物模型的构建方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

1)将具有DSPP基因c.144+1GA或c.144+1GT点突变的孤雄单倍体胚胎干细胞与卵细胞结合获得细胞胚胎；

2)培育所述细胞胚胎即获得DGI疾病动物模型。

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述DSPP基因c.144+1GA或c.144+1GT点突变后编码的蛋白质氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述孤雄单倍体胚胎干细胞为DKO-AG-haESCs。

4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述孤雄单倍体胚胎干细胞来源于哺乳动物；优选的，所述孤雄单倍体胚胎干细胞来源于啮齿动物；更优选的，所述孤雄单倍体胚胎干细胞来源于小鼠。

5.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述构建方法还包括以下特征中的一项或几项：

1)所述卵细胞与所述孤雄单倍体胚胎干细胞来源于同种动物；

2)所述卵细胞与所述孤雄单倍体胚胎干细胞结合采用卵胞浆注射法；

3)培育所述细胞胚胎是指将细胞胚胎移入到母体中，母鼠怀孕后生产获得点突变杂合鼠即为DGI疾病动物模型。

6.根据权利要求1-5任一所述的构建方法，其特征在于，所述DGI疾病动物模型的构建方法还包括以下特征：在c.144+1GA或c.144+1GT点突变的DSPP基因组上插入有标签。

7.根据权利要求6所述的构建方法，其特征在于，在c.144+1GA或c.144+1GT点突变的DSPP基因组的5’端和3’端插入有标签；优选的，5’端和3’端的标签不同。

8.根据权利要求7所述的构建方法，其特征在于，c.144+1GA或c.144+1GT点突变的DSPP基因组5’端插入标签后的核苷酸序列如SEQ ID NO.15所示，3’端插入标签后的核苷酸序列如SEQ ID NO.17所示。

9.一种DGI疾病动物模型，其特征在于，所述DGI疾病动物模型由权利要求1-8任一权利要求所述的构建方法制备获得。

10.权利要求9所述的DGI疾病动物模型在研究DSPP蛋白的时空表达谱式、切割谱式、蛋白定位以及DGI疾病发生发展机制中的用途。