[发明专利]一种牙本质发育不全的点突变动物模型构建方法及其应用

说明书

本发明涉及基础科研用动物模型领域，特别是涉及一种牙本质发育不全的点突变动物模型的构建方法及其应用。所述牙本质发育不全的点突变动物模型的构建方法，包括将具有DSPP基因c.144+1GA或c.144+1GT点突变的孤雄单倍体胚胎干细胞与卵细胞结合获得细胞胚胎；培育所述细胞胚胎即获得DGI疾病动物模型。所述构建方法还包括在c.144+1GA或c.144+1GT点突变的DSPP基因上插入有标签。本发明的动物模型的构建方法简洁，为研究病人基因突变对DSPP蛋白表达及功能的影响，以及明确病人杂合突变是如何造成DGI疾病表型提供方法。

技术领域

本发明涉及基础科研用动物模型领域，特别是涉及一种牙本质发育不全的点突变动物模型的构建方法及其应用。

背景技术

牙本质发育不全(dentinogenesis imperfect，DGI)属于牙体硬组织非龋性疾病，具有乳恒牙受累现象，是一种牙本质发育异常的常染色体显性遗传疾病，发病率为1/8000～1/6000。临床上常根据患牙的临床和影像学表现将牙本质发育不全分为3种亚型：Ⅰ型牙本质发育不全(DGI-Ⅰ)，患者常伴有成骨不全症，全身骨骼发育不全。全口牙齿呈半透明的琥珀色，磨耗明显；DGI-Ⅱ又名遗传性乳光牙本质，患者不伴有成骨不全症，无全身骨骼异常。患牙与DGI-Ⅰ牙齿相似，但完全通透；Ⅲ型牙本质发育不全(DGI-Ⅲ)，患牙多表现为空壳状和多发性露髓。

Xiao等在2001年首次发现遗传性牙本质发育异常的致病基因为牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein，DSPP)基因，DSPP及其蛋白剪切产物—牙本质涎蛋白(dentin sialoprotein，DSP)和牙本质磷蛋白(dentinphosphoprotein，DPP)均属于非胶原蛋白，对牙本质发育和矿化中起着重要作用。此外，DPP可通过形成矿化和结合结构蛋白，进而调节牙本质的生物矿化。目前研究认为DGI-II/III是由于DSPP基因发生突变而产生的，例如人的DSPP基因c.135+1位点杂合突变，不同家系突变位点不同，通常都为杂合突变。目前仅有DSPP纯合敲除的小鼠会出现DGI-III的表型，但杂合敲除小鼠没有疾病表型。而DSPP纯合敲除的小鼠无法研究病人突变对DSPP蛋白表达及功能的影响，也无法明确病人杂合突变是如何造成DGI疾病表型，因此DGI疾病的点突变动物模型和体内分子机制研究为空白。

发明内容

鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种DGI疾病动物模型的构建方法，用于解决现有技术中存在的问题。

为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供一种DGI疾病动物模型的构建方法，所述方法包括以下步骤：

1)将具有DSPP基因c.144+1GA或c.144+1GT点突变的孤雄单倍体胚胎干细胞与卵细胞结合获得细胞胚胎；

2)培育所述细胞胚胎即获得DGI疾病动物模型。

本发明还提供一种DGI疾病动物模型，所述DGI疾病动物模型由前述构建方法制备获得。

本发明还提供所述DGI疾病动物模型在研究DSPP蛋白的时空表达谱式、切割谱式、蛋白定位以及DGI疾病发生发展机制中的用途。

如上所述，本发明的DGI疾病动物模型的构建方法，具有以下有益效果：动物模型的构建方法简洁，为研究病人基因突变对DSPP蛋白表达及功能的影响，以及明确病人杂合突变是如何造成DGI疾病表型提供方法。

附图说明

图1显示为模拟病人突变的Dspp杂合突变小鼠构建与鉴定。

图2显示为Dspp杂合突变小鼠能很好的模拟病人DGI表型。

图3显示为模拟病人突变的Dspp WT-tag、GAmut-tag和GTmut-tag杂合小鼠构建。

图4显示为Dspp杂合突变标签小鼠能很好的模拟病人DGI表型。