[发明专利]基于CRISPR-Cas13a的牛病毒性腹泻病毒的检测方法有效
| 申请号： | 202010905632.8 | 申请日： | 2020-09-01 |
| 公开（公告）号： | CN111979357B | 公开（公告）日： | 2022-06-07 |
| 发明（设计）人： | 倪伟;胡圣伟;姚瑞;李村院;李晓悦;徐越仁 | 申请（专利权）人： | 石河子大学 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/682;C12N15/11 |
| 代理公司： | 乌鲁木齐恒智专利商标代理事务所(普通合伙) 65102 | 代理人： | 李靖 |
| 地址： | 832000 新疆维吾尔*** | 国省代码： | 新疆;65 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 基于 crispr cas13a 病毒性 腹泻 病毒 检测 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种检测牛病毒性腹泻病毒的引物，其特征在于：所述引物为：5’-GGGGAUUUAGACUACCCCAAAAACGAAGGGGACUAAAACGCCAUCCAACGAACUCACCACUGUUGCU-3’。
2.一种用于检测牛病毒性腹泻病毒的试剂盒，其特征在于：
包含纯化的LwCas13a蛋白45nM、特异性crRNA 22.5nM、淬灭荧光报告分子RNA 125nM、RNase抑制剂2uL和检测缓冲液的总体积40uL；
所述特异性crRNA为权利要求1所述的引物；
所述淬灭荧光报告分子RNA为：5’-GAAGAAGAGUUUAUUCAGAUAGAUUUGU-3’，
5'端修饰为FAM，3'端修饰为BHQ-1。
3.如权利要求2所述的用于检测牛病毒性腹泻病毒的试剂盒，其特征在于：
纯化的LwCas13a蛋白纯化步骤如下：先构建LwCas13a原核表达载体，将LwCas13a编码基因克隆至原核表达载体pET-28a+上构建pET-28a+-LwCas13a重组表达载体，之后将pET-28a+-LwCas13a重组表达载体转入RosettaTM(DE3)扩大培养，低温诱导其表达LwCas13a蛋白，在通过镍柱亲和层析法获得纯化的LwCas13a蛋白。
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