[发明专利]一种降低vWF制品中IgM含量的方法

说明书

本发明提供一种降低vWF制品中IgM含量的方法和采用该方法制备vWF冻干制剂的方法以及制得的vWF冻干制剂，属于血液制品领域，该方法包括使血浆及其衍生物通过包含多孔球状核心以及多孔惰性壳层的复合模式色谱树脂的层析柱，收集通过层析柱而没有与所述复合模式色谱树脂结合的含有vWF的流穿液；所述复合模式色谱树脂的多孔惰性壳层的排阻分子量为400‑700kDa。通过本发明公开的方法分离纯化vWF，能明显降低所得vWF样品中的IgM含量，且IgM去除效果明显优于现有Capto heparin、Q‑Sepharose层析方法，因此通过本发明公开的方法得到的vWF制品临床安全性更高。

技术领域

本发明涉及血液制品领域，具体涉及一种降低vWF制品中IgM含量的方法和采用该方法制备vWF冻干制剂的方法以及制得的vWF冻干制剂。

背景技术

血管性血友病因子(vWF，von Willebrand Factor)，是一种多聚体糖蛋白，单体分子量约为250千道尔顿(kD)，多聚体分子量为500～20000kD，是目前血浆中已知的分子量最大的蛋白。vWF单体分子在体内合成后，经多聚化形成一系列大小不等的多聚体，最大可包含1000个单体分子，其多聚化程度对于维持正常的生物学活性具有重要意义。vWF主要有2个功能，首先，它与凝血因子Ⅷ(FⅧ)非共价结合，防止其被蛋白C和凝血因子Xa激活，使FⅧ稳定而不易被降解，同时也是FⅧ的运输载体；其次，血浆vWF在原发性止血中起着重要作用，负责血小板与受损伤血管表面的黏附，由此形成血小板栓子，有助于纤维蛋白凝固的形成。

vWF制剂分为两种，一种是vWF/FⅧ复合物，另一种是高纯的vWF制剂。欧美发达国家vWD的日常治疗中，约占75％的I型患者首选DDAVP(1-脱氨基-8-D-精氨酸血管加压素)进行治疗，治疗无效的使用vWF制剂；约占25％的Ⅱ型和Ⅲ型患者主要使用vWF制剂。I型和Ⅱ型的vWD患者(占95％)按需治疗，即只有在患者发病出血的时候才需要注射药物，通常临床使用的药物是vWF/FⅧ复合物。Ⅲ型的vWD患者(占5％)需要进行预防治疗，即定期注射，通常临床使用的药物是高纯的vWF制剂。血液来源的vWF/FⅧ复合物其全球药品供应商仅有Grifols、CSL、Octapharma和Bio Products Laboratory 4家，血液来源的高纯vWF制剂，目前市场上仅有LFB公司生产的这一种高纯vWF制剂，因此亟需开发其他同类药品以解决治疗vWD用药品的可及性问题。

血液制品不同于一般药物，生产原料是健康人血浆，因此各大血液制品企业主要的研究方向为如何从原料血浆中尽可能地提取更多的血浆蛋白以提高血浆的综合利用率。因此从FⅧ生产废料中纯化vWF具有重要的经济价值，有利于提高血浆综合利用率，节约珍贵的血浆资源。

血浆中的大多数FⅧ与vWF以复合物形式存在，因此这两种蛋白质通常是共纯化的，从血浆及其衍生物中分离FⅧ或vWF非常困难。FⅧ或vWF通常以冷沉淀为原料，经过凝胶吸附和层析分离得到。由于部分vWF与FⅧ形成复合物并随着FⅧ的分离而被分离，FⅧ生产废料中的vWF含量大幅降低，而杂蛋白由于层析过程而富集，因此与从冷沉淀中分离纯化vWF相比，从FⅧ生产废料中纯化vWF难度更大。

专利US5760183报道了以FⅧ生产废料为原料，纯化vWF的工艺，具体包括：冷沉淀→氢氧化铝凝胶吸附→FⅧ的粗溶液→阴离子交换层析→FⅧ生产废料→Q-Sepharose。该专利公开的从FⅧ生产废料中纯化vWF的工艺再现性好，可在工业规模级别放大，生产成本低，但是该工艺无法有效去除vWF中的IgA和IgM，而IgM和IgA是vWF制剂中常见的杂蛋白，尤其是IgM杂蛋白，严重影响vWF制剂的临床安全性。