[发明专利]一种检测极端嗜盐生物中氨酰-tRNA合成酶和tRNA活性的系统及方法

权利要求书

1.一种检测翻译工具是否具有合成非天然氨基酸的蛋白质的活性的方法；

所述翻译工具为待测氨酰-tRNA合成酶和待测tRNA；

所述方法包括如下步骤：

(1)制备具有功能元件表达框的重组表达载体；功能元件表达框包括如下元件：报告蛋白的编码基因、待测氨酰-tRNA合成酶的编码基因、待测tRNA的编码基因；功能元件表达框中，报告蛋白的编码基因和待测氨酰-tRNA合成酶的编码基因以多顺反子形式被组成型启动子驱动表达；所述报告蛋白自N端至C端包括如下两个区段：标签蛋白区段、SAMP1_G24amb蛋白区段；SAMP1_G24amb蛋白区段对应于SAMP1蛋白的第2-87位氨基酸残基，并且相对于SAMP1蛋白的第2-87位氨基酸残基的编码基因而言，SAMP1_G24amb蛋白区段的编码基因中进行了一个密码子替换，该密码子为SAMP1蛋白的第24位氨基酸残基的密码子，由甘氨酸密码子替换为了“TAG”；

(2)将具有功能元件表达框的重组表达载体导入目标菌株，得到重组菌；

(3)在含有非天然氨基酸的环境中培养重组菌，然后检测重组菌中报告蛋白的表达情况。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(3)中，采用蛋白免疫印迹法检测重组菌的全菌蛋白中报告蛋白的表达情况。

3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述目标菌株为嗜盐底盘菌。

4.如权利要求1至3中任一所述的方法，其特征在于：具有功能元件表达框的重组表达载体先借助甲基化系统缺失的大肠杆菌进行扩繁，再导入所述目标菌株。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于：所述重组表达载体的出发载体为可在大肠杆菌和沃氏富盐菌中复制的穿梭质粒。

6.如权利要求1至5中任一所述的方法，其特征在于：功能元件表达框中，报告蛋白的编码基因和目标氨酰-tRNA合成酶的编码基因被组成型强启动子驱动表达，由T7终止子介导转录终止。

7.如权利要求1至6中任一所述的方法，其特征在于：功能元件表达框中，待测tRNA的编码基因被tRNA^Lys启动子驱动表达，由rrnC终止子介导转录终止。

8.如权利要求1至7中任一所述的方法，其特征在于：功能元件表达框中，报告蛋白的编码基因上游具有核糖体结合位点。

9.如权利要求1至8中任一所述的方法，其特征在于：功能元件表达框中，待测氨酰-tRNA合成酶的编码基因上游具有核糖体结合位点。

10.一种检测翻译工具是否具有合成非天然氨基酸的蛋白质的活性的试剂盒；

所述翻译工具为待测氨酰-tRNA合成酶和待测tRNA；

所述试剂盒包括特异DNA分子；

所述特异DNA分子包括如下元件：报告蛋白的编码基因、供待测氨酰-tRNA合成酶的编码基因插入的位点甲、供待测tRNA的编码基因插入的位点乙；所述报告蛋白自N端至C端包括如下两个区段：标签蛋白区段、SAMP1_G24amb蛋白区段；SAMP1_G24amb蛋白区段对应于SAMP1蛋白的第2-87位氨基酸残基，并且相对于SAMP1蛋白的第2-87位氨基酸残基的编码基因而言，SAMP1_G24amb蛋白区段的编码基因中进行了一个密码子替换，该密码子为SAMP1蛋白的第24位氨基酸残基的密码子，由甘氨酸密码子替换为了“TAG”；

使用时，将待测氨酰-tRNA合成酶的编码基因插入位点甲、待测tRNA的编码基因插入位点乙；报告蛋白的编码基因和待测氨酰-tRNA合成酶的编码基因以多顺反子形式被组成型启动子驱动表达。