[发明专利]一种非洲猪瘟病毒点亮RNA探针检测试剂盒及其制备方法和应用

说明书

一种非洲猪瘟病毒点亮RNA探针检测试剂盒及其制备方法和应用，属于食品生物技术领域。包括一种非洲猪瘟病毒点亮RNA探针，核苷酸序列如SEQ ID NO.1。该探针与非洲猪瘟病毒核酸序列p54的部分特异序列特异结合，核苷酸序列如SEQ ID NO.2。一种非洲猪瘟病毒点亮RNA探针检测试剂盒，包括检测滤纸片、p54部分特异序列SEQ‑p54和DEPC‑水溶液。非洲猪瘟病毒点亮RNA探针检测试剂盒在非洲猪瘟病毒检测上的应用。本发明点亮RNA探针亲和性强，和待测样品中的p54 RNA特异性结合，产生荧光。整个检测过程耗时短，成本低，能够在离体无活细胞和无活病毒的体系中对非洲猪瘟实现快速安全的检测。

技术领域

本发明属于食品生物技术领域，具体涉及一种非洲猪瘟病毒点亮RNA探针检测试剂盒及其制备方法和应用。

背景技术

非洲猪瘟(ASF)，是一种急性、发热传染性很高的滤过性病毒所引起的猪烈性传染病。ASF发病过程短，其中急性感染死亡率高达100%。临床表现为发热，心跳加快，呼吸困难等症状。ASF自1909年在肯尼亚首次报道后相继在全球多个国家发生、扩散和流行。截止目前，尚未有治疗ASF的特效方法。我国对非洲猪瘟疫情所采取的措施主要以预防和控制为主。因此，对肉质食品和临床疑似病毒的检测鉴别，能够为及早发现和控制非洲猪瘟提供病原学依据。随着分子生物学技术的发展，不同的技术手段已被开发用于ASF病毒的检测。常用的分子生物学技术如聚合酶链式反应(PCR，多重PCR，实时荧光定量PCR)、恒温基因扩增技术 (环介导恒温扩增(LAMP)、依赖核酸序列的扩增 (NASBA))等虽然具有特异性强、操作简便、检测量大、判断直观等优势。但同时缺点也较明显，如成本较高、引物设计存在限制、灵敏度不够高等。因此，一种快速、低廉、高精度的检测手段亟待开发。

核酸适配体技术最初主要用于活细胞成像和定位。核酸适配体具有稳定的二级结构，是一种能够和靶标分子特异性结合的人工合成核酸片段，它可以是DNA也可以是RNA，长度一般为25到60个核苷酸。基于发光效应的RNA适配体探针检测技术具有特异性好，灵敏度高，成本低且检测方法操作简便等优点。然而，目前国内尚未有非洲猪瘟病毒检测用的RNA探针试剂盒。

发明内容

针对上述现有技术中存在的问题，本发明的目的在于设计提供一种非洲猪瘟病毒点亮RNA探针检测试剂盒及其制备方法和应用。本发明根据非洲猪瘟病毒编码p54蛋白的核酸序列，设计了一种检测非洲猪瘟病毒的点亮RNA探针，利用所述RNA探针能够快速、方便、高效地鉴定非洲猪瘟病毒，特异性好，灵敏度高，且检测方法操作简便高效。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种非洲猪瘟病毒点亮RNA探针SEQ-lighting，其特征在于该探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

所述的一种非洲猪瘟病毒点亮RNA探针SEQ-lighting，其特征在于该探针与非洲猪瘟病毒核酸序列p54的部分特异序列SEQ-p54特异结合，所述SEQ-p54的核苷酸序列如SEQID NO.2所示。

所述的探针SEQ-lighting在制备用于非洲猪瘟病毒检测试剂盒中的应用。

一种非洲猪瘟病毒点亮RNA探针检测试剂盒，其特征在于包括检测滤纸片、p54部分特异序列SEQ-p54和DEPC-水溶液，所述检测滤纸片由9μL点亮RNA探针SEQ-lighting、64μL无细胞体外转录体系、1μL20 µM DFHBI、缓冲液10μL 140mM KCl、10μL 1mM MgCl₂、10μL10mM NaH₂PO₄、pH7.0滴加吸附在直径2mm的无菌滤纸片上，冷冻干燥后制得。

一种非洲猪瘟病毒点亮RNA探针检测试剂盒的制备方法，其特征在于包括以下步骤：