[发明专利]一种基于高通量测序检测子宫内膜癌相关基因突变的文库构建方法

权利要求书

1.一种基于高通量测序检测子宫内膜癌相关基因突变的文库构建方法，其特征在于，该文库构建方法使用的引物和探针序列如SEQ ID NO.1-759所示；所述子宫内膜癌相关基因为MSH2、PMS2、MLH1、MSH6、EPCAM、TP53、POLE和PTEN，具体包括如下步骤：

(1)使用引物和探针序列SEQ ID NO.1-759对待测样本进行多重PCR扩增获得文库；

(2)文库的纯化。

2.根据权利要求1所述的基于高通量测序检测子宫内膜癌相关基因突变的文库构建方法，其特征在于，所述待测样本为手术切除的新鲜病理组织，甲醛固定石蜡包埋病例组织，石蜡切片，全血，血浆，血清，胸腔积液中的一种。

3.根据权利要求1所述的基于高通量测序检测子宫内膜癌相关基因突变的文库构建方法，其特征在于，所述步骤(1)中PCR扩增程序如下表所示：

4.根据权利要求1所述的基于高通量测序检测子宫内膜癌相关基因突变的文库构建方法，其特征在于，所述步骤(1)中PCR扩增反应体系如下表所示；

序号	物料	物料浓度	用量(μL)
1	RingCap buffer	10×	2
2	2]]>	25mM	4
3	dNTPs	10μM	2
4	DNA富集反应引物MIX	50μM	5
5	2O]]>	纯化水	5.9
6	RingCap-Taq酶	5U/ul	0.5
7	Ion-BCXX-F	50μM	0.2
8	Ion-BCXX-R	50μM	0.2
9	C-Primer	50μM	0.2
10	DNA	2ng/ul	5
	总体积		25

所述Ion-BCXX-F和Ion-BCXX-R表示不对称连接探针组包括Ion-BC1-F、Ion-BC1-R、Ion-BC2-F、Ion-BC2-R、Ion-BC3-F、Ion-BC3-R、Ion-BC4-F、Ion-BC4-R、Ion-BC5-F、Ion-BC5-R、Ion-BC6-F、Ion-BC6-R、Ion-BC7-F、Ion-BC7-R、Ion-BC8-F和Ion-BC8-R，具体序列如SEQ ID NO.743-758所示，每种探针的浓度都是50μM，C-Primer为不与人类基因组形成互补的通用引物，具体序列如SEQ ID NO.759所示；

所述DNA富集反应引物MIX按照下表配制，且配制完成后取5μL用于PCR扩增反应：