[发明专利]一种利用松香基键合硅胶固定相分离紫杉醇的方法

说明书

本发明公开一种利用松香基键合硅胶固定相分离紫杉醇的方法，本发明属于高效液相色谱法领域，将活化后的硅胶利用硅烷偶联剂进行修饰，与可聚合松香基单体在引发剂条件下反应形成松香基键合硅胶固定相材料，设液相色谱仪置参数，将待测样品溶解后带入装有松香基键合硅胶固定相材料的色谱柱中，即可实现分离。其中，10‑脱乙酰巴卡亭Ⅲ和巴卡亭Ⅲ的分离度为3.33‑7.74，巴卡亭Ⅲ和10‑脱乙酰紫杉醇的分离度为3.48‑13.25，10‑脱乙酰紫杉醇和三尖杉宁碱的分离度为2.57‑5.49，三尖杉宁碱和紫杉醇的分离度为1.96‑5.34。本发明的方法对紫杉醇及其类似物具有较高的分离度和选择性，且该方法操作简单，灵敏度高，快速高效。

技术领域

本发明属于高效液相色谱法领域，具体涉及一种利用松香基键合硅胶固定相分离紫杉醇的方法。

背景技术

紫杉醇是人类最有效的抗癌药物之一，紫杉醇对食道癌、肺癌、卵巢癌、结肠癌及急性白血病有特殊的防治效果。通过探索基因工程、化学半合成、化学全合成等方法，成本较高。从红豆杉取材进行提取、分离纯化紫杉醇，是制备紫杉醇的主要方法。

红豆杉根、皮、枝、叶中含有紫杉烷类(二萜类化合物)、黄酮类化合物等物质，其中紫杉烷类代表物有紫杉醇、三尖杉宁碱、10－脱乙酰基紫杉醇(紫杉醇的结构类似物)、巴卡亭Ⅲ、10－脱乙酰基巴卡亭Ⅲ(半合成紫杉醇的重要前体化合物)。因此，将紫杉醇及其类似物分离开来，具有重要意义。

目前，关于紫杉醇及其类似物分离法的报道，申请号为201010258652.7的发明专利公开一种三尖杉宁碱和紫杉醇的分离方法；首先将紫杉醇和三尖杉宁碱的混合物溶于短链脂肪醇，加入有机碱类催化剂，室温搅拌下进行1,4—加成反应，得到三尖杉宁碱衍生物和紫杉醇，然后将三尖杉宁碱衍生物溶解，加入活化炭，回流过滤，浓缩，重结晶得到三尖杉宁碱。操作步骤繁琐，降低了紫杉醇的收率，增加了成本。

申请号为201410522893.6的发明专利公开一种除去紫杉醇中三尖杉宁碱的方法；包括如下步骤：1)准备原料：将含三尖杉宁碱的紫杉醇粗品溶解于有机溶剂中制成溶液A；将高锰酸钾溶解于有机溶剂中制成溶液B；2)反应：在溶液A中加入溶液B进行反应,并将反应后的溶液过滤；3)一次结晶：将步骤2)所得滤液结晶,过滤和干燥处理后得到三尖杉宁碱含量在1％以下的紫杉醇粗品；4)柱层析：将步骤3)所得粗品进行柱层析,收集含紫杉醇的有效段,浓缩干燥；5)二次结晶：将步骤4)得到的干燥物进行结晶处理,过滤和干燥后得紫杉醇。操作步骤繁琐，降低了紫杉醇的收率，增加了成本。

还有的研究人员以粒径单分散聚苯乙烯反相色谱填料为色谱柱固定相，即采用MKF-DK-RP型分析柱(300mm×7.8mm，8μm)，流动相为乙腈-水溶液，流速为1.0mL/min，检测波长为229nm，建立了一种分析紫杉醇与三尖杉宁碱的简易方法。结果表明，本方法可使紫杉醇与三尖杉宁碱达到有效分离，且紫杉醇的检测浓度在0.0625～2.0mg/mL范围内线性关系良好。虽然方法简单，重复性好；但其对紫杉醇及其类似物的分离效果不太理想，色谱柱的柱效低。

因此，现需研究一种更为高效的分离紫杉醇及其类似物的材料和方法。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明公开一种利用松香基键合硅胶固定相分离紫杉醇的方法，应用松香基键合硅胶固定相色谱柱分离紫杉醇的方法，该方法对紫杉醇及其类似物具有较高的分离度和选择性，且该方法操作简单，灵敏度高，快速高效。

本发明公开如下技术方案：

一种利用松香基键合硅胶固定相分离紫杉醇的方法，包括如下步骤：

(1)溶液配制：将待测样品放入有机溶剂中溶解，配制成浓度为1-1000μg/mL的紫杉醇及其类似物的混合溶液；