[发明专利]一种面肩肱型肌营养不良症的基因分析方法

说明书

本发明公开了一种面肩肱型肌营养不良症的基因分析方法，其包括如下步骤：S1、人基因组DNA样品的制备：低熔点胶包埋法抽提完整的外周静脉血基因组DNA；S2、人基因组DNA限制性内切酶消化与分离；S3、探针制备：制备EcoRI+Sacl双酶切分离插入的PI3E‑11探针片段，电泳检测确定探针的纯度、长度和浓度；S4、Southern转移、DNA分子杂交；S5、杂交条带分析及分子量测定：根据X光胶片，结合凝胶照片，测量出各片段的分离距离，利用曲线拟合法算出各杂交片段的大小，进行基因分析。本发明所述的面肩肱型肌营养不良症的基因分析方法特异性强、灵敏度高，简单快速，适用于临床推广。

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，更具体地，涉及一种一种面肩肱型肌营养不良症的基因分析方法。

背景技术

面肩肱型肌营养不良症(Facioscapulohumeral muscular dystrophy，FSHD)是一种遗传性肌肉疾病，表现为进行性面肌、肩脚带肌及上肢肌群的萎缩和肌无力，受其影响最严重的是脸、肩、上臂等部位的肌肉。FSHD几乎都是由遗传缺陷所造成的，这些遗传缺陷会导致4号染色体(4q35)亚端粒区上的DNA片段比正常人的短。缺失部分并非某一特殊的基因，它可能是通过影响一个或多个其它的基因而导致该病的发生。不同FSHD患者病情的进展速度和严重程度的差别很大，病人很多在十几岁开始出现症状，大部分病人在20岁之前已有症状产生，也有些人早在幼儿期或者晚到50多岁才出现肌无力症状。有些人的病情非常轻微，以至于看不出什么症状，这样的病人往往自己没有觉察到有病，只是在有患病更重的亲属被诊断出来之后才发现自己患病。临床上判定FSHD诊断的标准包括以下3点：(1)常染色体显性遗传方式；(2)面肌(额肌、眼轮匝肌或口轮匝肌)萎缩无力；(3)肩带肌、上臂肌或足背屈肌萎缩无力。在大部分FSHD病人中，病情进展非常慢，其预后虽较其它肌营养不良症(如DMD、LGMD等)好，一般不影响寿命，但致残率高，约20％FSHD病人最终需坐轮椅，对患者的生存质量构成较大影响。面肩肱型肌营养不良症具有终身性和可遗传性，患者每生一个后代都有50％的患病机会，因此早期诊断以及进行症状前诊断不仅有利于患者对其职业和婚姻早作打算，更有利于遗传咨询，从而防止本病一代代遗传下去。目前对本病尚无特效的治疗方法，遗传咨询和基因诊断是预防本病的关键措施。

面肩肱型肌营养不良症基因被定位于4q35(FSHD1A)，95％以上的FSHD病例与4q35区的3.3kb串联重复单位D4z4缺失导致EcoIR片段缩短有关。有研究表明，此片段可用pl3E-11探针((D4F104SI))通过Southern杂交来检测，正常人其大小为35-300kb，患者由于缺失而小于35kb。然而，p13E-11在10q26区也可检测到一个片段，其序列与4q35有高度同源性，具有相类似的长度多态性，且也可小于35kb，但这种却是没有致病性的。因此，若只是直接进行EoRI/Pl 3E-11片段的检测，可能导致基因诊断的误诊。因此，需寻求一种特异性强、灵敏度高、简单快速并适用于临床推广的面肩肱型肌营养不良症基因检测方法，为今后对FSHD分子发病机制的研究、FSHD疾病的预防及治疗奠定基础。

发明内容

本发明旨在克服上述现有技术的至少一种缺陷，提供一种面肩肱型肌营养不良症的基因分析方法特异性强、灵敏度高，能使不同来源的EcoRI片段的判断更加准确、直观，并适用于临床推广。

本发明采取的技术方案如下：

一种面肩肱型肌营养不良症的基因分析方法，包括如下步骤：

S1、人基因组DNA样品的制备：低熔点胶包埋法抽提完整的外周静脉血基因组DNA；

S2、人基因组DNA限制性内切酶消化与分离：进行人基因组DNA的限制性内切酶消化和酶切样品脉冲电泳分离；

S3、探针制备：制备EcoRI+Sacl双酶切分离插入的PI3E-11探针片段，电泳检测确定探针的纯度、长度和浓度；