[发明专利]一种利用大肠杆菌高效表达并分泌人生长激素的方法

权利要求书

1.一种重组人生长激素核苷酸序列，其特征在于，所述核苷酸序列依次包含限制性酶酶切切位点1、核糖体结合位点、信号肽编码区、人生长激素编码区hGH、限制性内切酶酶切位点2，其中，信号肽为大肠杆菌热稳定肠毒素Ⅱ信号肽编码序列SEQ ID NO：1，人生长激素编码区hGH编码序列为SEQ ID NO：2。

2.根据权利要求1所述的一种重组人生长激素核苷酸序列，其特征在于，所述限制性酶酶切位点1为-XbaI酶切位点，所述限制性内切酶酶切位点2为XhoI酶切位点，重组人生长激素核苷酸序列为SEQ ID NO：3。

3.一种含有权利要求1或2所述的重组人生长激素核苷酸序列的重组表达载体，其特征在于，重组表达载体含有重组人生长激素核苷酸序列，通过将所述重组人生长激素氨基酸序列经过双酶切后插入到载体pET28a(+)获得重组表达载体。

4.一种含有权利要求3所述的重组表达载体表达人生长激素蛋白的工程菌，其特征在于，所述工程菌为含有重组表达载体的大肠杆菌BL21。

5.一种利用权利要求4所述的工程菌表达人生长激素蛋白的方法，其特征在于表达方法包括以下步骤：a)将工程菌按1:100(v/v)接种；b)置于37摄氏度条件下培养3-5小时，加入1mM IPTG，在25-30摄氏度条件下诱导3-5小时；c)低温离心收集表达了人生长激素蛋白的菌体。

6.根据权利要求5所述的表达人生长激素蛋白的方法，其特征在于，培养大肠杆菌所用培养基为LB培养基。

7.根据权利要求6所述的表达人生长激素蛋白的方法，其特征在于，在37摄氏度培养3-4小时后，然后加入1mM IPTG继续28摄氏度诱导3-5小时。

8.一种利用权利要求5或6或7所述的人生长激素蛋白的菌体纯化重组人生长激素的方法，其特征在于包括以下步骤：

1)将步骤c)所得的菌体进行超声破碎或低温冻融破碎，离心收集上清；

2)30kD超滤管超滤，取穿透液，穿透液经5kD超滤管超滤取截留液；

3)将步骤2)获得的截留液过Q离子交换柱，洗涤液洗涤得到纯化的hGH蛋白。