[发明专利]提取分离纯化桦褐孔菌醇的方法

说明书

本发明提供一种从桦褐孔菌中提取分离纯化桦褐孔菌醇的方法。本发明方法以异丙醇进行提取，提取液减压蒸馏后用石油醚萃取，再用C18制备色谱柱吸附，50‑100％乙醇(或甲醇)梯度洗脱后得桦褐孔菌醇。采用本发明方法得到的桦褐孔菌醇呈白色蓬松片晶状，纯度可达90％以上，具有耗时短、低毒性等优势，适于推广使用。

技术领域

本发明涉及生物提取技术领域，具体涉及一种提取分离纯化桦褐孔菌醇的方法。

背景技术

桦褐孔菌(Inonotus obliquus)属于真菌门、担子菌亚门、多孔菌科，主要分布在北半球气温较低的地区。在我国也主要分布在黑龙江、吉林(主要分布于长白山)等地。很早以前，人们就发现桦褐孔菌有着特殊的活性。人们用桦褐孔菌泡茶、煎煮慢慢地发现该真菌能够防治胃癌、肝癌、肠癌等多种癌症。桦褐孔菌醇(inotodiol)是桦褐孔菌特有的甾醇，体外实验发现桦褐孔菌醇不仅能抑制癌细胞的生长还能有效杀伤癌细胞。动物实验表明桦褐孔菌醇在体内有显著的促进抗肿瘤机制的发生的作用。有研究发现从桦褐孔菌中分离得到的四环三萜类物质桦褐孔菌醇可以通过细胞凋亡信号通路诱导小鼠体内白血病细胞的凋亡蛋白酶来发挥抗恶性细胞增值的作用。桦褐孔菌醇结构中22位碳上的-OH是桦褐孔菌醇发挥抗肿瘤活性的非常重要的活性基团。

目前，桦褐孔菌中甾醇化合物的提取方法主要为索氏提取法、有机溶剂浸提法、超声或微波辅助提取法等。桦褐孔菌醇的分离方法主要有硅胶柱层析反复分离法，高速逆流色谱分离法，高效液相色谱法。普通硅胶柱层析法，产品纯度高，但存在洗脱溶剂毒性强，过程繁琐，用时较长以及产量低等特点。高速逆流色谱法作为一种高效、方便方法被用于科研实验室分离药用植物、药用真菌的有效成分，但该法消耗有机溶剂多，难以放大规模进行工业化分离，使用有局限性。

发明内容

有鉴于此，本发明提出了一种高提取率、高纯度的提取分离纯化桦褐孔菌醇的方法。本发明采用柱层析法提取，石油醚萃取，C18修饰硅胶柱层析分离桦褐孔菌醇，具有用时短，低毒性，高提取率，高纯度的特点。

本发明的通过如下技术方案实现：

本发明提供一种提取分离纯化桦褐孔菌醇的方法，所述方法包括以下步骤：

S1、将桦褐孔菌子实体粉碎后按一定料液比加入异丙醇溶液预浸泡，随后加入层析柱中，采用异丙醇溶液洗脱得到提取液；

S2、将提取液减压浓缩，采用石油醚萃取，得干粉；

S3、将干粉上样层析柱，采用甲醇或乙醇溶液梯度洗脱，收集主要洗脱峰；

S4、洗脱峰减压回收后，浓缩液冷冻干燥得桦褐孔菌醇冻干粉。

在一些实施方式中，所述S1中的异丙醇溶液均为100％的异丙醇溶液。

在一些实施方式中，所述S1中所述料液比为1kg:1～5L，优选为1kg:1L。

在一些实施方式中，所述S1中所述预浸泡时间为0.5～1h，优选为0.5h。

在一些实施方式中，所述S1中洗脱流速为1BV/h，总洗脱时间为2h。

在一些实施方式中，所述S1中所述层析柱为普通硅胶层析柱，优选的，所述层析柱的柱直径：柱床高度＝1:5。

在一些实施方式中，所述S2为将提取液50～55℃(优选50℃)减压回收异丙醇后浓缩，用纯水洗涤悬浮浓缩物后加入等体积的石油醚萃取3次，每次30min，合并上层石油醚相，55～60℃(优选60℃)减压回收石油醚得干粉。

在一些实施方式中，所述S3中干粉装入上样柱的上样量为柱填充质量的5～10％，优选为5％。

在一些实施方式中，所述S3中层析柱填料为C18修饰硅胶，优选的硅胶为球形，粒径为20～45μm；