[发明专利]一种从铜藻中提取黑麦草内酯的方法

说明书

一种从铜藻中提取黑麦草内酯的方法，包括如下步骤：步骤一：清洗，并阴干；步骤二：粉碎；步骤三：提取；步骤四：初步提纯；步骤五：二次提纯。黑麦草内酯的传统来源是从忍冬科荚蒾中提取，但提取方法比较繁琐；本发明提供了一种从铜藻中黑麦草内酯的方法，为黑麦草内酯的提取提供了一种新原料，并且该提取方法更为简单，且提取效率更高，纯度更高。

技术领域

本发明属于药物分离工艺领域，具体涉及一种从铜藻中提取黑麦草内酯的方法。

背景技术

铜藻Sargassum herneri(Turn)C.Ag。俗称“丁香屋”，已用于藻胶制造工业，在农业、生物医药、食品、饲料工业等行业也被广泛应用，具有较高的商业价值。民间存有铜藻全藻药用的习惯，其有效成分特别是有生物活性的特效成分研究得仍较少，仅见报道含褐藻酸、甘露醇、多糖等成分。因而该藻并未得到有效的开发利用。

黑麦草内酯(Loliolide)的化学结构式如下所示，其分子式为C₁₁H₁₆O₃，相对分子量为196.246。经报道，黑麦草内酯具有抗菌、抗肿瘤的生物活性，还可以抑制EB病毒的早期抗原EBV-EA的产生；另有报道其具有一定的免疫抑制作用；此外，黑麦草内酯还可以抑制藻类生长，是一种潜在的水体富营养化控制剂。因此，黑麦草内酯具有一定的研究价值与经济价值。目前，黑麦草内酯的主要来源是从植物中提取分离，而从铜藻中提取黑麦草内酯的方法还未见报道。

发明内容

针对现有技术问题，本发明的目的在于提供一种从铜藻中提取黑麦草内酯的方法。

为了达到上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种从铜藻中提取黑麦草内酯的方法，包括如下步骤：

步骤一：清洗，用海水与淡水间隔冲洗铜藻，挑除杂质，并阴干；

步骤二：粉碎，将阴干后的铜藻在80℃的烘箱中烘干，得到干燥的铜藻，并将其粉碎，得到铜藻粉末；

步骤三：提取，将铜藻粉末分散到乙醇和二氯甲烷的混合溶液中，升温到50-60℃，搅拌3-5小时，并过滤，将滤液蒸除溶剂后，得到粗提取物；

步骤四：初步提纯，将粗提取物用中性氧化铝进行柱层析，以二氯甲烷-乙酸乙酯为洗脱剂，并且依次增加乙酸乙酯的浓度进行梯度洗脱，每一梯度洗脱3-5个柱体积，并且收集每个柱体积的洗脱液，并用TLC分析洗脱液中的成分，并收集Rf值为0.6-0.65的组分，合并并浓缩，得到黑麦草内酯粗品；

步骤五：二次提纯，将黑麦草内酯粗品用甲醇溶解，并缓慢加入二氯甲烷，降温至-10℃，使得黑麦草内酯结晶析出，过滤，并用二氯甲烷淋洗滤渣并干燥，即可得到高纯度的黑麦草内酯。

优选的，步骤一中海水与淡水间隔冲洗为先用海水冲洗，后用淡水冲洗，并重复3次。

优选的，步骤三中铜藻粉末与混合溶液的质量体积比为8g：3-5mL；混合溶液由体积比为乙醇：二氯甲烷＝3:1制备而成。

优选的，步骤四中梯度洗脱过程为：100％二氯甲烷→0.8-1.2％乙酸乙酯→6-10％乙酸乙酯→15-20％乙酸乙酯→25-35％乙酸乙酯→40-50％乙酸乙酯→100％乙酸乙酯；TLC分析用硅胶薄层板，在体积比10:1的二氯甲烷-甲醇混合液作为展开剂下进行。

优选的，步骤五中黑麦草内酯粗品与甲醇的质量体积比为1g：3-5mL；按体积比甲醇：二氯甲烷＝3-5:1。

本发明的有益效果如下：

黑麦草内酯的传统来源是从忍冬科荚蒾中提取，但提取方法比较繁琐；本发明提供了一种从铜藻中黑麦草内酯的方法，为黑麦草内酯的提取提供了一种新原料，并且该提取方法更为简单，且提取效率更高，纯度更高。