[发明专利]快速检测抗生素的时间分辨荧光免疫层析试剂盒

权利要求书

1.一种快速检测抗生素的时间分辨荧光免疫层析试剂盒，其特征在于，包括：

试剂条，其包括塑料卡壳，塑料卡壳内夹层排布有PVC板、样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸收垫，所述样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫依次搭接组装在PVC板上，吸水垫和结合垫分别交叠压在硝酸纤维素膜的两端，样品垫交叠压在结合垫上，在硝酸纤维素膜上依次设置有检测T线和质控C线；

其中，所述结合垫上吸附有Eu荧光微球标记的特异性氟喹诺酮类抗生素结合核酸蛋白复合物和兔IgG抗体，检测T线上包被有氟喹诺酮类抗生素抗原牛血清蛋白复合物，质控C线上包被羊抗兔二抗；

提取液，所述提取液中包括细胞裂解液和核酸水解液，

过滤柱以及过滤液，所述过滤液包含核酸水解酶抑制剂。

2.根据权利要求1所述的快速检测抗生素的时间分辨荧光免疫层析试剂盒，其特征在于，嗅蛋白与TYLCV-C1蛋白通过化学修饰或者非共价键连接，获得连接蛋白，所述抗生素特异性结合ssDNA的5’端连接有cgtataatatta序列，将所述连接蛋白与抗生素特异性结合ssDNA连接，加入终浓度为6mM的锰离子，于25℃反应10min，获得蛋白核酸复合物。

3.根据权利要求1所述的快速检测抗生素的时间分辨荧光免疫层析试剂盒，其特征在于，抗生素特异性结合ssDNA的序列为：

5’-TAGGGAATTC 10

GTCGACGGAT 20

CCTGGCGCTT 30

AGGTGTAATA 40

ACCTGAGGAC 50

GGCTTGGCTG 60

CAGGTCGACG 70

CATGCGCCG-3’79。

4.根据权利要求1所述的快速检测抗生素的时间分辨荧光免疫层析试剂盒，其特征在于，将氟喹诺酮类抗生素与牛血清蛋白制备具有免疫源性和反应源性的全抗原，偶联比例为1∶100，偶联后透析纯化，得到氟喹诺酮类抗生素牛血清蛋白复合物。

5.根据权利要求1所述的快速检测抗生素的时间分辨荧光免疫层析试剂盒，其特征在于，氟喹诺酮类抗生素牛血清蛋白复合物用PBS-蔗糖缓冲液稀释为1mg/mL，制得检测T线液，用点膜机在硝酸纤维膜上喷点检测T线液，制备检测T线；羊抗兔二抗用PBS-蔗糖缓冲液稀释为1mg/mL，制得检测C线液，用点膜机在硝酸纤维膜上喷点检测C线液，制备检测C线；将喷点后的硝酸纤维膜在低温下烘干。

6.根据权利要求1所述的快速检测抗生素的时间分辨荧光免疫层析试剂盒，其特征在于，所述细胞裂解液包括以下质量分数的组分：Triton X-100 3％，SDS 1％，Nacl 5％；所述核酸水解液为200U/L的核酸水解酶。

7.根据权利要求1-6任一项所述的快速检测抗生素的时间分辨荧光免疫层析试剂盒，其特征在于，该试剂盒的使用方法包括以下步骤：

1)称取待测组织0.5-1g，置于匀浆管中，往匀浆管中加入1mL的提取液，匀浆，获得匀浆液；

2)将匀浆液置于过滤柱的上端，离心以使滤渣和滤液分离，往所述过滤柱的上端再次添加1mL的过滤液，离心，收集滤液，混合均匀，获得待检测液；

3)将待检测液滴入样品垫，5min后使用POTC分析仪读取T线的荧光强度和C线的荧光强度并计算T/C值，根据制备的标准曲线计算出样品中氟喹诺酮类抗生素的浓度。

8.根据权利要求1所述的快速检测抗生素的时间分辨荧光免疫层析试剂盒，其特征在于，氟喹诺酮类抗生素为氧氟沙星。