[发明专利]快速检测抗生素的时间分辨荧光免疫层析试剂盒

说明书

本发明公开了一种快速检测抗生素的时间分辨荧光免疫层析试剂盒，其包括：试剂条，其包括塑料卡壳，塑料卡壳内夹层排布有PVC板、样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸收垫，在硝酸纤维素膜上依次设置有检测T线和质控C线；其中，所述结合垫上吸附有Eu荧光微球标记的特异性氟喹诺酮类抗生素结合核酸蛋白复合物和兔IgG抗体，检测T线上包被有氟喹诺酮类抗生素抗原牛血清蛋白复合物，质控C线上包被羊抗兔二抗；提取液，所述提取液中包括细胞裂解液和核酸水解液，过滤柱以及过滤液，所述过滤液包含核酸水解酶抑制剂。本发明具有检测灵敏度高、特异性强以及检测快捷等特点。

技术领域

本发明属于抗生素检测领域。更具体地说，本发明涉及一种快速检测抗生素的时间分辨荧光免疫层析试剂盒。

背景技术

氟喹诺酮类抗生素是一类由人工合成的广谱类抗菌药，具有良好的杀菌，如大肠杆菌，沙门氏菌，肺炎克雷伯氏杆菌，布氏杆菌，多杀性巴氏杆菌，胸膜肺炎放线杆菌，猪丹毒杆菌，变形杆菌，化脓性棒状杆菌，败血波氏杆菌等。因此，氟喹诺酮类抗生素在畜牧业养殖中得到了良好的普及。氟喹诺酮类抗生素的作用机理在于抑制细菌ssDNA旋转酶，阻断ssDNA复制而发挥快速杀菌。

随着氟喹诺酮类抗生素应用范围的扩大，其在动物性食品中的残留问题逐渐引起了人们的重视。动物性食品中氟喹诺酮类兽药残留的危害主要体现在：一方面当人们使用残留一定量氟喹诺酮类的动物性食品后,其中的残留剂量可进入人体消化系统,并对相关器官造成损伤；另一方面当人们长期摄入含有氟喹诺酮类的动物性食品后，其中的残留药物成分可诱导人体各类致病菌产生耐药性，进而为氟喹诺酮类在人类抗菌治疗中的应用产生阻碍作用。因此，动物性食品中氟喹诺酮类兽药残留检测具有很重要意义。

发明内容

本发明的一个目的是解决至少上述问题和/或缺陷，并提供至少后面将说明的优点。

本发明还有一个目的是提供一种快速检测抗生素的时间分辨荧光免疫层析试剂盒，其能够快速、准确的检测出动物性食品残留的氟喹诺酮类抗生素。

为了实现本发明的这些目的和其它优点，提供了一种快速检测抗生素的时间分辨荧光免疫层析试剂盒，其包括：

试剂条，其包括塑料卡壳，塑料卡壳内夹层排布有PVC板、样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸收垫，所述样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫依次搭接组装在PVC板上，吸水垫和结合垫分别交叠压在硝酸纤维素膜的两端，样品垫交叠压在结合垫上，在硝酸纤维素膜上依次设置有检测T线和质控C线；

其中，所述结合垫上吸附有Eu荧光微球标记的特异性氟喹诺酮类抗生素结合核酸蛋白复合物和兔IgG抗体，检测T线上包被有氟喹诺酮类抗生素抗原牛血清蛋白复合物，质控C线上包被羊抗兔二抗；

提取液，所述提取液中包括细胞裂解液和核酸水解液，

过滤柱以及过滤液，所述过滤液包含核酸水解酶抑制剂。

本发明通过将具有特异性结合氟喹诺酮类抗生素的ssDNA序列的连接至蛋白质上，并通过Eu荧光微球标记在蛋白质上，使得在激发光的作用下，Eu荧光微球标记的特异性氟喹诺酮类抗生素结合核酸蛋白复合物发出稳定的荧光，从而实现对动物性食品中残留氟喹诺酮类抗生素的检测。

优选的是，嗅蛋白与TYLCV-C1蛋白通过化学修饰或者非共价键连接，获得连接蛋白，所述抗生素特异性结合ssDNA的5’端连接有cgtataatatta序列，将所述连接蛋白与抗生素特异性结合ssDNA连接，加入终浓度为6mM的锰离子，于25℃反应10min，获得蛋白核酸复合物。本发明以TYLCV-C1蛋白为嗅蛋白和抗生素特异性结合ssDNA的连接枢纽，实现将抗生素特异性结合ssDNA连接至嗅蛋白上；嗅蛋白具有增强Eu荧光的作用，将Eu荧光微球标记在嗅蛋白上，通过嗅蛋白的荧光增强作用，进一步增强了本发明的检测下限。

优选的是，抗生素特异性结合ssDNA的序列为：