[发明专利]一种蓝莓果实表皮蜡质的提取方法

权利要求书

1.一种蓝莓果实表皮蜡质的提取方法，其特征在于：包括以下步骤：

S1、计算蓝莓果实表面积：用游标卡尺测量蓝莓果实赤道部位直径d、高度h，其中d和h的单位为cm，单个蓝莓果实的表面积S₁＝π*(d+h)²/4；

S2、溶解蜡质：

S2.1、将20个大小均匀、无病虫害、表面无损伤的蓝莓果实置于烧杯中，加入20mL三氯甲烷，常温轻摇提取2次，每次1min，彻底溶解表皮蜡质层，3次重复；

S2.2、溶有蜡质的氯仿溶液通过直径9cm的中速定量滤纸过滤于试管中，试管的初始质量为m₀，单位为μg；

S2.3、使用氮吹仪，恒温水浴40℃，在恒定流速8L/min的氮气流下将带有蜡质的溶液蒸发至干，对试管和干燥的样品进行称量，质量记为m₁，单位为μg；

S2.4、蓝莓果实表皮总蜡质含量的计算公式如下：蜡质含量L＝(m₁-m₀)/S，其中L的单位为μg/cm²，S为20个蓝莓的总表面积即20*S₁；

S3、蜡质衍生化：

S3.1、在稳定的氮气流下加入100μL N,O-双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺和100μL吡啶，立即用封口膜包住试管口，此步操作注意严格防水；

S3.2、金属浴70℃条件下保持40分钟，期间每隔十分钟涡旋震荡试管底部蜡质，使试管中的蜡质充分进行衍生化反应；

S3.3、反应完成后，在恒定流速6L/min氮吹下吹干N,O-双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺溶液，待试管冷却至室温；

S3.4、加入1mL三氯甲烷溶液重新溶解衍生化后的蜡质，再加入100μL正二十四烷内标溶液，震荡混匀；

S3.5、一次性注射器吸取混匀后的溶液，用直径13mm、孔径0.20μm的一次性有机系滤器过滤至2.0mL棕色自动进样瓶中，瓶中提前装好玻璃质材的内插管；

S4、使用气相色谱-质谱联用仪测定蜡质组分。

2.根据权利要求1所述的一种蓝莓果实表皮蜡质的提取方法，其特征在于：步骤S4包含以下内容：

S4.1、初始条件：使用气相色谱质谱联用仪，采用通用型毛细管柱HP-5；自动进样量1μL，分流比为2:1；

色谱条件为：前进样口温度250℃，质谱源温度230℃，Aux-2温度280℃，色谱柱恒定流速1mL·min^-1，质谱条件为：以He作为载气，气流速15mL·min^-1，开始等待时间1min；

进样口压力60.732kPa，电子轰击电离方式，能量70eV，质量扫描范围50-720amu，全扫描方式，溶剂延迟3min；

升温过程：70℃保持2min，以6℃·min^-1升温至190℃，保持3min；以5℃·min^-1升温至270℃，保持3min，再以,3℃·min^-1升温至290℃，保持5min，最后以2℃·min^-1升温至300℃，保持5min；

S4.2、各种蜡质成分经GC-MS检测后得到其离子峰，依据质谱库进行检索判定，并按一定的条件对离子峰进行面积积分，确定并分纳物质的归类，以内标法定量计算蜡质各组分浓度，结合峰面积归一化法计算各组分相对质量分数。