[发明专利]一种蓝莓果实表皮蜡质的提取方法

说明书

本发明公开了一种蓝莓果实表皮蜡质的提取方法，使用三氯甲烷浸提蓝莓,氮吹后，用BSTFA(N,O‑双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺)和吡啶进行衍生化反应，再上样进行GC‑MS检测；进行定量过滤，采用金属浴进行衍生化，改进了气相色谱质谱检测过程的升温过程，形成了一套新的蓝莓蜡质提取与检测的方法；具体的步骤包括计算蓝莓果实的表面积；通过浸提法将蜡质从蓝莓果实上溶解下来；对蜡质进行衍生化；使用气相色谱质谱联用仪(7890A GC,5975MS,Agilent Technologies,U.S.A.)测定蜡质的各组分和含量。通过上述设置，能够更加充分的提取蓝莓果实表皮蜡质，更加容易分离检测到蜡质混合物的各组分并得到其含量。

技术领域

本发明涉及蓝莓种植领域，具体为一种蓝莓果实表皮蜡质的提取方法。

背景技术

蓝莓果实表皮有一层白色的由表皮薄壁细胞分泌合成的次生代谢产物组成的疏水结构层，叫做蜡质。它是蓝莓果实抵抗非生物和生物侵染第一道天然屏障，在帮助蓝莓适应不利环境和保证自身生长、发育等方面具有重要作用，可以隔绝病原微生物和虫害，防止紫外线伤害、减轻机械损伤，减少水分散失，限制内部组织物质的损失，防止物理、化学和生物攻击，并提供机械支持以维持植物器官的完整性，在改善蓝莓果实品质、延长贮藏保鲜期和提高采后病原菌抗性等方面也起着重要作用。

蓝莓果实表皮蜡质的提取和检测对研究蜡质与果实生理代谢相关性具有重要意义。

常用的表皮蜡质提取方法有直接浸提法和酶提法，酶提法操作复杂且需要一定温度环境，在果实中常采用的是直接浸提法。在以下的文献中，《Changes in Cuticular WaxComposition of Two Blueberry Cultivars during Fruit Ripening and PostharvestCold Storage》,J.Agric.Food Chem.2018,66,2870-2876，楚文靖等使用三氯甲烷液浸提蓝莓1min,氮吹之后再用BSTFA和吡啶进行衍生化反应，最后上样进行GC-MS检测。

然而，该方法对于蜡质的提取仍然存在一定的改进空间，因此进行改进，并提出本申请。

发明内容

本发明的目的在于提供一种蓝莓果实表皮蜡质的提取方法，其能够更加充分的提取蓝莓果实表皮蜡质，更加容易分离检测到蜡质混合物的各组分并得到其含量。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种蓝莓果实表皮蜡质的提取方法,包括以下步骤：

S1、计算蓝莓果实表面积：用游标卡尺测量蓝莓果实赤道部位直径d、高度h，其中d和h的单位为cm，单个蓝莓果实的表面积 S₁＝π*(d+h)²/4；

S2、溶解蜡质：

S2.1、将20个大小均匀、无病虫害、表面无损伤的蓝莓果实置于烧杯中，加入20mL三氯甲烷，常温轻摇提取2次，每次1min，彻底溶解表皮蜡质层，3次重复；

S2.2、溶有蜡质的氯仿溶液通过直径9cm的中速定量滤纸过滤于试管中，试管的初始质量为m₀，单位为μg；

S2.3、使用氮吹仪，恒温水浴40℃，在恒定流速8L/min的氮气流下将带有蜡质的溶液蒸发至干，对试管和干燥的样品进行称量，质量记为m₁，单位为μg；

S2.4、蓝莓果实表皮总蜡质含量的计算公式如下：蜡质含量 L＝(m₁-m₀)/S，其中L的单位为μg/cm²，S为20个蓝莓的总表面积即20*S₁；

S3、蜡质衍生化：