[发明专利]一种靶向淋巴瘤细胞的外泌体及其制备方法和应用

说明书

本发明属于生物药物载体制备领域，公开了一种连接CD22‑F(ab’)₂抗体片段的外泌体，所述外泌体表面经过CD22‑F(ab’)₂抗体片段修饰，既能保留CD22mAb结合能力，又可避免Fc段介导的吞噬细胞的吞噬作用，从而延长载药颗粒的体内循环时间。此外，创新性地构建一种外泌体载药体系。该载药体系可有效穿越血脑屏障，具有生物相容性好、靶向精准主动、循环时间长等优势，可将抗肿瘤药物引导递送至中枢神经系统病灶，靶向释放药物，有效提高药物抗中枢神经系统淋巴瘤疗效，减轻外周毒副作用，将为各种类型抗中枢淋巴瘤化疗药物在体内的有效传递建立通用平台，为临床中枢神经系统淋巴瘤的靶向治疗提供有力的手段。

技术领域

本发明属于生物药物载体制备领域，涉及一种靶向中枢神经系统的外泌体及其制备方法和应用。

背景技术

原发性中枢神经系统淋巴瘤(PCNSL)为一种高度侵袭性的非霍奇金淋巴瘤，90％以上亚型为弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)。原发性中枢神经系统淋巴瘤约占颅内原发肿瘤的1％-5％、所有淋巴瘤的1％。由于血脑屏障的存在，诸多可应用于DLBCL的药物难以抵达颅内病灶，原发性中枢神经系统淋巴瘤的五年生存率仅为20％-30％，且大约25％的PCNSL出现原发耐药，近50％最终会复发。目前治疗均需超大剂量化疗药物以保证进入中枢的化疗药物达到有效血药浓度，因而化疗药物在杀伤肿瘤细胞的同时，往往对正常组织和器官造成不可逆的损害，降低人体免疫能力，达不到预期治疗效果。

应用纳米载体携载化疗药物穿越血脑屏障是中枢性疾病治疗的有效方法。然而，目前利用高分子材料构建的纳米载药体系存在着一些不易解决的问题，如生物相容性较差、对疏水性药物的释放存在一定影响、稳定性差等。故具有良好生物利用度且可将细胞毒性药物有效运输至中枢神经系统淋巴瘤的外泌体(Exo)具备成为新型生物载体的优异潜质。

外泌体来源广泛，在血液中稳定性高，体内循环时间长，免疫原性低，有更高的药物传输效率及更强的增强渗透滞留效应，这些特性使其有可能成为一种天然的内源性药物载体。其次，外泌体表面存在多种黏附蛋白和特定的载体配体，可避免调理素、凝血因子或补体的激活，使载体避免被网状内皮系统捕获；且外泌体为磷脂双分子层膜结构，易于与受体细胞融合，有助于其运送并释放内容物至靶细胞。此外，外泌体为直径大小约为40～150nm的小囊泡，外泌体可有效利用增强渗透滞留效应，通过细胞间间隙透出血管，选择性地渗入肿瘤组织部位并滞留，从而进一步实现对肿瘤的被动靶向作用。尤其值得关注的是，纳米级的外泌体可穿越血脑屏障及血脑脊液屏障。

由于90％以上的B细胞淋巴瘤细胞上有CD22抗原表达，且CD22抗原的表达率为80％-100％，远高于正常成熟B淋巴细胞，并且结合CD22的抗体可以被迅速内化，因此anti-CD22作为化学免疫偶联物也引起瞩目，被应用于将细胞毒性药物靶向递送至肿瘤细胞。然而，完整的CD22mAb具有的Fc段易被单核吞噬细胞吞噬、清除，从而导致药物靶向的效率低，精准性查。因此，亟需研发针对中枢神经系统淋巴瘤、可有效穿越血脑屏障的且靶向效率高的新型靶向治疗策略。

发明内容

为克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种以连接CD22-F(ab’)₂抗体片段的外泌体，以及其制备方法，同时作为药物载体包载抗肿瘤药物的应用，制成携载抗肿瘤药物连接CD22-F(ab’)₂抗体片段的外泌体靶向载药体系，具有生物相容性好、载药率高、主动靶向性强、在肿瘤组织的酸性环境中释放率高，从而增加药物的抗肿瘤活性等优点。

第一方面，本发明提供了一种靶向淋巴瘤细胞的外泌体，所述外泌体表面经过CD22-F(ab’)₂抗体片段修饰。

第二方面，本发明还提供了第一方面所述的靶向淋巴瘤细胞的外泌体的制备方法，所述方法包括以下步骤:

步骤S1：外泌体纯化及表面修饰，得到表面修饰的外泌体；