[发明专利]一种肿瘤细胞的分离提取方法

说明书

本发明涉及肿瘤细胞分离技术领域，具体涉及一种肿瘤细胞的分离提取方法，采用以纳米级玉米淀粉为基体的分离介质实现肿瘤细胞的富集分离，所述纳米级玉米淀粉表面依次沉积聚多巴胺和功能性材料的功能层，并固定有将抗循环肿瘤细胞特异性抗原的抗体结合到基体上的结合层。本发明以纳米级玉米淀粉为基体制作分离介质，形成不会团聚的独立“纳米分散体”，结构极其稳定，成本低廉的同时，可以实现循环肿瘤细胞的高效吸附，操作简单，可控性强，具有广阔的应用前景。

技术领域

本发明涉及肿瘤细胞分离技术领域，具体涉及一种肿瘤细胞的分离提取方法。

背景技术

恶性肿瘤的复发和转移是影响肿瘤预后和导致患者死亡的重要原因。循环肿瘤细胞(circulating tumor cell，CTC)是从原发及继发肿瘤病灶脱落进入外周血的肿瘤细胞。近年来研究表明，CTC作为一种新型的实时监测非侵入性诊断工具，可有效应用于肿瘤的早期诊断及监测复发和转移，监测疾病进展，评估化疗药物疗效和预测肿瘤预后等方面，并且在肿瘤的分类治疗、个体化治疗时代，CTC的准确捕获与检测可为癌症患者提供最及时、最优化的治疗方案。相比传统的影像学检查及组织活检，CTC检测具有实时动态监测疾病变化、疗效评价等优势。

CTC在外周血中的含量非常少，每10ml血液中含有约1亿个白细胞和500亿个红细胞，而CTC仅含少数几个或几十个，因此，在进行检测和生物学分析之前，应首先对待检测样品中的CTC进行有效的富集与分离。目前，伴随现在检测技术的广泛应用，以及对肿瘤转移机制的深入研究，CTC逐渐被人们所重视，人们研制并开发了多种用于循环肿瘤细胞的富集、检测及分子生物学表征等技术。现有富集CTC的方法主要有三种：密度梯度离心法、过滤法和免疫磁珠分离法。密度梯度离心法和过滤法是根据血液中各种细胞密度或尺寸不同的原理进行分离，分离纯度低，且密度梯度离心法在细胞的处理过程中会不可避免的损失肿瘤细胞，影响捕获效率。免疫磁珠分离法虽能捕获效率较高，但其制作过程复杂、费用较高限制了其广泛应用。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供了一种肿瘤细胞的分离提取方法，具有高效、简易、价廉的特点，可控性强。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：

一种肿瘤细胞的分离提取方法，采用以纳米级玉米淀粉为基体的分离介质实现肿瘤细胞的富集分离，所述纳米级玉米淀粉表面依次沉积聚多巴胺和功能性材料的功能层，并固定有将抗循环肿瘤细胞特异性抗原的抗体结合到基体上的结合层。

进一步地，所述纳米级玉米淀粉的孔径为50～300nm，结合层通过氢键、静电吸附或功能蛋白质共价结合方式将抗循环肿瘤细胞特异性抗原的抗体结合到基体上。

进一步地，所述功能层中聚多巴胺和功能性材料的质量比为4～10:1。

进一步地，所述功能层表面沉积纳米级玉米淀粉与生物素的混合层；再使用链霉亲和素或者亲和素与所述混合层中的生物素结合；最后将偶联有生物素的抗循环肿瘤细胞特异性抗原的抗体与所述链霉亲和素结合。

进一步地，所述抗体为抗EGFR抗体、抗MUC-1抗体、抗EGFR-2抗体、抗EpCAM抗体、抗HER2抗体中的至少一种。

进一步地，所述混合层中纳米级玉米淀粉与生物素的质量比为0.02～0.16∶1；所述基体表面除去偶联抗体之外的其余各层总厚度为5nm～60nm。

进一步地，所述功能层为包含元素铜、金或银的金属单质、合金、金属氧化物或金属氢氧化物。

进一步地，包括如下步骤：

S1、采用以纳米级玉米淀粉为基体的分离介质实现血样中循环肿瘤细胞的吸附处理；

S2、通过断开基体与功能层或者功能层与结合层之间的连接，实现吸附的循环肿瘤细胞的释放；

S3、分离并收集释放后的循环肿瘤细胞。

本发明具有以下有益效果：