[发明专利]一种以人复制缺陷型重组腺病毒为载体的O型口蹄疫疫苗

说明书

本发明提供一种以人5型复制缺陷腺病毒为载体的新型O型口蹄疫疫苗。所述疫苗以E1、E3联合缺失的复制缺陷型人5型腺病毒为载体，以整合腺病毒E1基因的HEK293细胞为包装细胞系，插入的抗原基因为经过优化设计的O型口蹄疫结构及非结构基因(FMDV‑O)，最终形成人复制缺陷型腺病毒为载体的重组O型口蹄疫病毒(Ad5‑FMDV‑O)。该病毒制备的疫苗在小鼠模型上表现出良好的免疫原性，在免疫后7天，即可诱导小鼠产生明显的细胞免疫。免疫后7天，在中高剂量疫苗注射组，已产生中和抗体，免疫21天后，所有剂量疫苗注射组，均产生显著的中和抗体，且中高剂量组抗体滴度明显高于低剂量组且中高剂量组无差异。

技术领域

本发明涉及生物工程领域，具体涉及一种以人复制缺陷型重组腺病毒为载体的O型口蹄疫疫苗。

背景技术

口蹄疫是由口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)引起的,发生于牛、羊、猪等偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病。世界动物卫生组织将口蹄疫列为动物A类烈性传染病,我国农业农村部将口蹄疫病毒列为一类动物病原微生物，口蹄疫为一类疫病。口蹄疫严重危害畜牧业的健康发展以及相关产品的对外贸易,对国家的政治、经济具有深远的影响。口蹄疫病毒(FMDV)有O、A、C、SAT1、SAT2、SAT3(即南非口蹄疫病毒1、2、3型)和Asia1(亚洲1型)7个血清型。各型之间几乎没有交叉免疫保护。我国主要流行O型、A型。我国农业农村部于2019年12月印发了《2020年国家动物疫病强制免疫计划》，对于口蹄疫明确要求：对全国所有猪、牛、羊、骆驼、鹿进行O型口蹄疫免疫；对全国所有奶牛和种公牛进行A型口蹄疫免疫。此外,内蒙古、云南、西藏、新疆和新疆生产建设兵团对所有牛和边境地区的羊、骆驼、鹿进行A型口蹄疫免疫,广西对边境地区牛羊进行A型口蹄疫免疫,吉林、青海、宁夏对所有牛进行A型口蹄疫免疫,辽宁、四川对重点地区的牛进行A型口蹄疫免疫。这些措施及计划，强调了口蹄疫疫苗对于口蹄疫病毒在我国的净化的重要性。目前，我国的经济动物所使用的O型口蹄疫疫苗，主要以O型口蹄疫病毒制备的灭活疫苗为主，一些新型的疫苗，如多肽疫苗，也有一定的使用量。

发明内容

本发明提供如下任一所述蛋白：

(a1)蛋白，其氨基酸序列自N端至C端依次包括：O型口蹄疫病毒的结构蛋白P1的氨基酸序列、O型口蹄疫病毒的非结构蛋白2A的氨基酸序列、O型口蹄疫病毒的非结构蛋白2B的氨基酸序列、O型口蹄疫病毒或A型口蹄疫病毒非结构蛋白3B部分蛋白的氨基酸序列、O型口蹄疫病毒或A型口蹄疫病毒非结构蛋白3C蛋白的氨基酸序列；

(a2)蛋白，其氨基酸序列自N端至C端依次包括：甲硫氨酸、O型口蹄疫病毒的结构蛋白P1的氨基酸序列、O型口蹄疫病毒的非结构蛋白2A的氨基酸序列、O型口蹄疫病毒的非结构蛋白2B的氨基酸序列、O型口蹄疫病毒或A型口蹄疫病毒非结构蛋白3B部分蛋白的氨基酸序列、O型口蹄疫病毒或A型口蹄疫病毒非结构蛋白3C蛋白的氨基酸序列、标签蛋白的氨基酸序列。

可选的，所述O型口蹄疫病毒的结构蛋白P1为O/SEA/Mya98株的结构蛋白P1；所述O型口蹄疫病毒的非结构蛋白2A为O/SEA/Mya98株的非结构蛋白2A；所述O型口蹄疫病毒的非结构蛋白2B为O/SEA/Mya98株的非结构蛋白2B；

所述O型口蹄疫病毒3B部分蛋白为O/SEA/Mya98株的3B部分蛋白；

所述A型口蹄疫病毒非结构蛋白3B部分蛋白为A/A24株或A/A12株的3B部分蛋白；

所述A型口蹄疫病毒非结构蛋白3C蛋白为A/A24株或A/A12株的3C蛋白；

所述O型口蹄疫病毒非结构蛋白3C蛋白为O/SEA/Mya98株的3C蛋白；

可选的，所述O/SEA/Mya98株的结构蛋白P1的氨基酸序列如SEQ ID NO：2第2位至735位所示；其编码DNA分子的核苷酸序列如SEQ ID NO：1第4-2205位所示；