[发明专利]一种食品病原菌副溶血弧菌快速检测的试剂盒及方法

说明书

本发明属于生物技术、食品检测领域，具体是一种食品病原菌副溶血弧菌快速检测的试剂盒及方法。为建立一种高效、快速、准确且经济的检测方法，本发明公开了一种基于PCR‑DGGE检测食品病原菌副溶血弧菌的试剂盒包括引物组、DNA片段，PCR缓冲液，STE缓冲液。本发明具体是以化学合成的食品病原菌副溶血弧菌的DNA片段作为待测样品的标准参考，当样品条带与标准条带处于同一水平位置时，即可确定样品中含有食品病原菌副溶血弧菌，本发明利用DGGE检测食物中的食品病原菌副溶血弧菌，时间短、实验结果准确、可重复、技术易普及，同时批量分析多个样品。与增菌培养、高通量测序及荧光定量PCR相比，为一种高效快速经济便捷的检测方法。

技术领域

本发明属于生物技术、食品检测领域，涉及食品病原菌检测相关的凝胶电泳(DGGE)技术，具体是一种食品病原菌副溶血弧菌快速检测的试剂盒及方法。

背景技术

副溶血弧菌是革兰氏阴性菌，是一种常见的病原菌。副溶血弧菌食物中毒也称嗜盐菌食物中毒，是进食含有该菌的食物所致，主要来自海产品或盐腌渍品，常见者为蟹类、乌贼、海蜇、鱼、黄泥螺等，其次为蛋品、肉类或蔬菜。临床上以急性起病、腹痛、呕吐、腹泻及水样便为主要症状。该病菌广泛存在于海水和海产品中，是我国沿海地区常见的食物中毒病原菌。如果食用了被此菌污染的海鲜，会引发食物中毒。

近年来，人们的生活水平不断日益提高，越来越多的家庭不仅满足于要吃饱，对营养的搭配需求更全面更均衡，所以，越来越多的海鲜产品进入了普通家庭。如何快速的检测海鲜产品中的食品病原菌副溶血氏菌成为了我们目前一个急需解决的问题。目前检测副溶血弧菌主要有以下几种方法：增菌培养：取标本37℃进行培养，后分离培养将标本接种副溶血氏菌选择培养基35℃培养18～24h观察结果。这种方法耗时长，需等待菌的生长，同时紧靠肉眼判断，实验结果不准确。在实时荧光定量PCR中，前期对样本的处理也许24h左右。在突发公共卫生事件中该技术无法做到高通量快速检测，不能起到有效的监测、预防作用，并且在试验结果的判定方面对检测人员的要求比较高。

发明内容

为建立一种实现高效、快速、准确且经济的食品病原菌副溶血氏菌的快速检测方法，本发明公开了一种基于PCR-DGGE检测食品病原菌副溶血氏菌的试剂盒和检测方法。

为了达到上述目的，本发明采用了下列技术方案：

本发明提供一种用于食品病原菌副溶血弧菌的快速检测的引物组及DNA片段，所述引物组包括SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3所示的引物；所述DNA片段为SEQ IDNO：4所示的片段。

进一步，所述引物组及DNA片段是通过化学合成的核苷酸片段。

本发明提供一种用于食品病原菌副溶血弧菌快速检测的试剂盒，包括上述引物组和DNA片段，PCR缓冲液，STE缓冲液。

进一步，所述PCR缓冲液包括5μl 10×Easy Taq Buffer，4μl 10mmol/L dNTPs，1μl上游引物，1μl下游引物，1μl Taq酶，1.5μl基因组DNA，36.5μl ddH₂O。

进一步，所述STE缓冲液是由0.584g的NaCl、0.12g的Tris和0.37g的EDTA溶解于100ml的双重蒸馏水配制而成的。

本发明还提供一种食品病原菌副溶血弧菌快速检测的方法，包括以下步骤：

步骤1，提取样品微生物基因组总DNA；

步骤2，分别以超纯水、化学合成的DNA片段及样品总DNA为模板进行PCR扩增，超纯水扩增产物作为待测样品的阴性对照，化学合成的DNA片段扩增产物作为待测样品的标准；样品PCR扩增产物作为DGGE检测的待测样品；

步骤3，对标准和待测样品进行DGGE检测；